任务1细菌菌落总数的测定43课件.pptx

任务1细菌菌落总数的测定(PCA平板计数)李宝玉副教授开始学习广东农工商职业技术学院(GB4789.2—2022)

目录CONTENTS1目的2原理3材料

目录CONTENTS4流程5步骤6结果

思考题?菌落总数和细菌总数是否一样？细菌菌落总数测定原理和方法，一定条件的含义？菌落总数测定评价卫生学意义？适宜稀释度如何选择？梯度稀释如何实施？检验的量是25g（ml），为什么不是其他量？如何计数、计算？菌落总数适宜菌落计数范围？报告的单位？

思考题什么是细菌菌落总数（cfu）？影响杂菌总数准确性的因素有哪些？在食品卫生检验中，为什么要以细菌菌落总数为指标？为什么培养基在使用前要保持在46±1℃的温度？

01目的

目的1、??学习并掌握食品中细菌菌落总数测定方法和原理。

2?、菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。

02原理

原理细菌数量的表示方法由于所采用的计数方法不同而有两种：菌落总数和细菌总数。1、菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中形成的细菌菌落总数。以cfu/g（ml）来表示。一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、PH值、需氧性质等。

原理按国家标准方法规定，即在需氧情况下，36±1℃培养48±2h，能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，也不能区分其中细菌的种类，只包括一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

原理菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。

原理2、细菌总数指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1m1样品中的细菌总数来表示。

03材料

材料1、?食品检样2、?培养基平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液3、?其它无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。

04流程

流程36±1℃培养48±2小时或（24±2）小时计算各平板菌落计算菌落总数报告检样做几个适当倍数的稀释液选择2~3个适宜稀释度各以1ml分别加入灭菌平皿内平皿内倾注15～20ml平板计数琼脂培养基，混匀

流程25g移1ml225ml生理盐水均质PCA冷却倒置46±1℃保温空白9ml生理盐水各1ml各1ml各1ml各1ml边倒边摇匀············固体样品菌落总数检测流程36±1℃移1ml固体样品9ml9ml

流程

05步骤

步骤适宜的稀释度如何确定？产品国标倒推法（适宜计数范围-国标限量）

步骤（一）取样、稀释和培养

1、以无菌操作取检样25g（ml），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1～2min，制成1：10的均匀稀释液。

步骤

步骤2、用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混合均匀，制成1:100的稀释液。（一）取样、稀释和培养3、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支10ml吸管。4、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。

步骤5、稀释液移入平皿后，将凉至46℃平板计数琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动平皿，混合均匀。（一）取样、稀释和培养

步骤6、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固后培养。（