生物检测员岗位面试问题及答案.docx

生物检测员岗位面试问题及答案

1.聚合酶链式反应（PCR）的基本原理是什么？操作中如何避免污染？

答：PCR原理是利用DNA聚合酶在体外扩增特定DNA片段，通过变性（94℃）、退火（55-65℃）、延伸（72℃）循环实现指数级扩增。避免污染措施：分区操作（试剂准备区、样品制备区、扩增区），使用带滤芯吸头，试剂分装避免反复冻融，定期用紫外线照射实验室和工作台，每次实验设置阴性对照（无模板水）。

2.酶联免疫吸附试验（ELISA）中，间接法与夹心法的区别是什么？

答：间接法用于检测抗体，步骤为包被抗原→加待检血清→加酶标二抗→显色，适用于病原体抗体筛查；夹心法用于检测抗原，步骤为包被抗体→加待检抗原→加酶标抗体→显色，适用于大分子抗原（如病毒蛋白）检测。区别在于检测对象（抗原/抗体）和试剂添加顺序不同，夹心法特异性更高。

3.革兰氏染色的操作步骤及结果判断标准是什么？

答：步骤：涂片固定→结晶紫初染1分钟→碘液媒染1分钟→95%乙醇脱色20秒→沙黄复染1分钟。结果判断：革兰氏阳性菌呈紫色（如葡萄球菌），阴性菌呈红色（如大肠杆菌），脱色时间是关键，过度脱色会导致阳性菌误判为阴性。

4.简述细菌菌落总数测定的流程及注意事项。

答：流程：样品稀释（10倍系列稀释）→倾注平板（每个稀释度做2个平行）→36±1℃培养48±2小时→菌落计数。注意事项：稀释时摇匀避免微生物团块，倾注培养基温度控制在46℃左右，避免烫死细菌；菌落数在30-300CFU/平板有效，多稀释度符合要求时取中间稀释度计算，结果以CFU/g(mL)表示。

5.实时荧光定量PCR（qPCR）的定量方法有哪些？如何制作标准曲线？

答：定量方法包括绝对定量（已知浓度标准品制作曲线）和相对定量（ΔΔCt法）。标准曲线制作：制备5-6个数量级的标准品（如质粒DNA梯度稀释），每个浓度做3个复孔，以Ct值为纵坐标，标准品浓度对数为横坐标，拟合线性方程，要求相关系数R2≥0.99，扩增效率在90%-110%之间。

6.生物安全柜的使用注意事项有哪些？如何验证其性能？

答：注意事项：开机预热30分钟，操作前用75%酒精消毒台面，样品放置不超过柜内体积50%，避免交叉污染；操作时手臂缓慢进出，结束后紫外照射30分钟。性能验证：每年检测气流流速（0.36-0.54m/s）、沉降菌（≤5CFU/30分钟）、高效过滤器完整性（烟雾测试），确保符合GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》。

7.简述质粒DNA提取的主要步骤及关键试剂作用。

答：步骤：细菌培养→离心收集菌体→加溶液I（葡萄糖维持渗透压）重悬→加溶液II（NaOH/SDS裂解细胞）→加溶液III（乙酸钾中和，沉淀杂质）→酚-氯仿抽提→乙醇沉淀DNA→干燥后TE溶解。关键试剂：SDS破坏细胞膜，酚-氯仿去除蛋白质，乙醇使DNA脱水沉淀，RNaseA去除RNA污染。

8.细胞传代培养的操作要点是什么？如何判断细胞生长状态？

答：要点：弃旧培养基，PBS洗去血清→0.25%胰酶消化（显微镜观察细胞变圆）→加完全培养基终止消化→离心收集细胞→传代接种（密度1×10?-3×10?cells/mL）。生长状态判断：显微镜下观察，贴壁细胞呈梭形或多边形，密度70%-80%融合时传代最佳；悬浮细胞密度达1×10?cells/mL时传代，细胞存活率＞90%（台盼蓝染色）。

9.ELISA实验中，出现“钩状效应”的原因及解决方法是什么？

答：原因：待测抗原浓度过高，导致包被抗体和酶标抗体均与抗原结合，形成“夹心复合物”空间位阻，显色信号偏低（假阴性）。解决方法：稀释样品至线性范围内，或使用高亲和力抗体，采用捕获法（先加过量抗体包被）或两步法（先加样品孵育，洗去未结合抗原后加酶标抗体）避免过剩抗原干扰。

10.微生物药敏试验（K-B法）的操作流程及结果判读标准是什么？

答：流程：制备0.5麦氏浊度菌悬液→均匀涂布MH琼脂平板→贴药敏纸片→35℃培养16-18小时→测量抑菌圈直径。判读：参照CLSI标准，抑菌圈直径＞临界值为敏感（S），介于临界值与耐药值之间为中介（I），＜耐药值为耐药（R），需注意纸片保存条件（2-8℃）和孵育时间，避免影响结果准确性。

11.你为什么选择应聘生物检测员岗位？

答：选择该岗位是因为对生命科学检测技术感兴趣，希望通过精准检测为生物医药研发、食品安全等领域提供科学依据。自身专业（如生物技术、生物工程）与岗位匹配，实习期间参与过微生物检测和分子生物学实验，掌握PCR、ELISA等技能，且性格细致专注，能严格遵守实验规范，认为该岗位能将理论应用于实践，符合职业发展规划。

12.你认为生物检测员的核心职责是什么？

答：核心职