第三节细胞的传代培养技术08课件.pptx

第三节

细胞的传代培养技术;细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。

传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。;1．将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

2．加入0.5—1ml0.25％胰蛋白酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液

中。

3．放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐

趋于圆形，在还未漂起时将胰蛋白酶弃去，加入10ml培养液终

止消化（观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针

孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟）。

4．用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，置

37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。;第四节

细胞计数技术;培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。

在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。