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珠菌DNA损伤修复因子MAG1的功能研究与毒力调控作用分析
目录
文档概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.1真菌感染现状与挑战．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.2DNA损伤修复机制研究的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.2MAG1基因概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.2.1MAG1基因的鉴定与定位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.2.2MAG1蛋白的结构与特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
1.3本研究的切入点与目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
2.1实验材料与菌株．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
2.1.1菌株来源与保藏．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
2.1.2培养基与生长条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
2.2.1基因操作技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
2.2.2DNA损伤检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.2.3修复效率评估技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
2.2.4毒力相关表型分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
2.2.5分子生物学常用技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
2.3数据统计与分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
MAG1功能分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
3.1MAG1对真菌DNA损伤的应答作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
3.1.1确定DNA损伤模型．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
3.1.2MAG1在损伤应答中的表达变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
3.2MAG1参与DNA损伤修复的机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
3.2.1对单链/双链断裂修复的贡献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
3.2.2可能的相互作用蛋白筛选与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
3.3MAG1对真菌细胞周期与存活的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
3.3.1细胞周期分布分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
3.3.2对损伤后存活率的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
MAG1毒力调控作用分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
4.1MAG1对真菌致病性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
4.1.1在动物感染模型中的毒力比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
4.1.2体外致病相关表型分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
4.2MAG1对毒力相关基因表达的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
4.2.1分子机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49
4.2.2关联毒力基因的筛选与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
4.3环境因素对MAG1毒力功能的调节．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
4.3.1pH、温度等因素的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．
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