克氏原螯虾JNK基因参与调控抗弧菌先天免疫反应的分子机制研究.pdfVIP

摘要

克氏原螯虾，又称小龙虾，是我国重要的淡水养殖虾之一。随着小龙虾产业的发

展，推动了集约化养殖系统的兴起。然而，其特殊的解剖结构和半开放循环系统使得

在恶劣环境中病原菌更容易侵入全身组织，引发多种疾病。集约化养殖可能降低虾类

免疫力，增加疾病爆发的风险，导致虾类生长缓慢和存活率下降，进而增加养殖成本。

提升水产养殖品种的抗病能力已成为当前急需解决的挑战。无脊椎动物依靠其先天免

疫系统实现自我保护，果蝇等无脊椎动物的研究表明JNK基因在免疫调节中起着关键

作用。因此，研究JNK基因在克氏原螯虾先天免疫中的作用机制和调控途径，有助于

制定针对克氏原螯虾等淡水养殖虾的免疫增强策略，促进养殖业的可持续发展，同时

也为无脊椎动物先天免疫系统的深入研究提供重要线索。

本研究以克氏原螯虾组织器官为样本，通过PCR扩增获得JNK基因的DNA片段，

并通过NCBI库进行比对后，将其命名为Pc-JNK。利用生物信息学分析发现Pc-JNK

分子具有丝氨酸苏氨酸蛋白激酶的催化结构域，主要功能是促进ATP合成和增强蛋白

激酶活性。qRT-PCR实验检测结果显示Pc-JNK在小龙虾免疫器官中肝胰腺的表达量

最高。在哈维氏弧菌刺激后，各组织中Pc-JNK的表达量均出现不同程度上调，因此推

测JNK基因可能参与克氏原螯虾的抗细菌先天免疫。为进一步研究JNK基因的分子作

用机制，进行了RNA干扰实验。注射JNKdsRNA后，肝胰腺中JNK基因的表达水平

被显著抑制。RNAi实验显示，与对照组相比，干扰JNK基因后注射哈维氏弧菌的实

验组克氏原螯虾存活率显著下降、细菌增殖量上升、黑化反应前期减弱、酚氧化酶活

性前期减弱，同时内源抗菌肽的相关的toll3、crustin2、ALF1、lectin3等基因的表达

量受到显著抑制。最后，通过二代转录组测序分析发现，Pc-JNK在分解代谢、信号转

导和免疫系统等功能方面呈现富集。

本研究对Pc-JNK基因从抗细菌以及二代转录组测序两个方面进行探索，进一步证

实了该基因引起的免疫反应变化能够协调宿主自身的酚氧化酶系统和抗菌肽合成途径，

揭示了该基因参与调控抗细菌先天免疫的作用，并进一步明确了JNK基因在抗细菌先

天免疫中的重要性。这为下一步深入探索免疫信号通路的调控奠定了基础，同时也为

无脊椎动物抗细菌先天免疫系统提供了重要补充。

关键词：克氏原螯虾；先天免疫系统；JNK基因；RNA干扰；二代转录组测序

Abstract

TheProcambarusclarkii,alsoknownasfreshwatercrayfish,isoneoftheimportant

freshwateraquaculturespeciesinChina.Thedevelopmentofthecrayfishindustryhasledtothe

riseofintensiveaquaculturesystems.However,itsuniqueanatomicalstructureandsemi-open

circulatorysystemmakeitsusceptibletopathogeninvasioninharshenvironments,resultingin

variousdiseases.Intensiveaquaculturemaydecreasetheimmunityofcrayfish,increasingtherisk

ofdiseaseoutbreaksandreducinggrowthratesandsurvivalrates,thusincreasingaquaculture

costs.Enhancingthediseaseresistanceofaquaculturespecieshasbecomeanurgentchallenge.

Invertebratesrelyontheirinnateimmunesystemsforself-protection,andstudiesoninvertebrates

suchasfr