微生物的现代分类鉴定方法遗传分类法食品微生物控制技术10课.pptxVIP

微生物的现代分类鉴定方法---遗传分类法食品质量与安全专业教学资源库Theteachingresourcelibraryoffoodqualityandsafety主讲教师：鲁慧芳河南农业职业学院《食品微生物控制技术》

目录ContentsDNA中(G+C)含量的分析1DNA-DNA杂交2DNA-rRNA杂交316SrRNA（16SrDNA）寡核苷酸的的序列分析4

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA中(G+C)含量的分析DNA中（G+C）含量分析主要用于区分细菌的属和种，DNA碱基比例主要是指（G+C）含量[通常用（G+C）mol%表示]，即为鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）在整个DNA中含量的数值是恒定的，不会随着环境条件、培养条件等的变化而变化。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA中(G+C)含量的分析在同一属不同种之间，DNA中（G+C）含量的数值不会差异太大，可在某个数值为中心成簇分布，线束同属微生物种的（G+C）含量范围。一般情况下，细菌DNA中（G+C）含量的变化范围一般在25-75%。而放线菌DNA中（G+C）含量范围非常窄（25-75%）。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA中(G+C)含量的分析一般认为，任何两种微生物在（G+C）含量上的差别超过了10%，这两种微生物就肯定不是同一种。因此可以利用（G+C）含量来鉴别各种微生物种属间亲缘关系及远近程度。常用热变性程序法即用紫外分光光度计测定DNA的溶解温度Tm的方法来测定（G+C）的含量。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA中(G+C)含量的分析值得注意的是，亲缘相近的菌，其（G+C）含量相同或者相似，但（G+C）含量相同或者相似的菌，其亲缘关系不一定相近，这是因为这一数据还不能反映出碱基对的排列序列。要比较两对菌的DNA碱基对排列序列是否相同以及相同的程度如何，就需要做核酸杂交实验。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA-DNA杂交其原理是用DNA解链的可逆性和碱基配对的专一性，将不同来源的DNA在体外加热解链，并在合适的条件下，互补的碱基重新配对结合成双链DNA，然后根据能生成双链的情况，检测杂合百分数。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA-DNA杂交如果两条单链DNA的碱基序列只有部分相同，则它们能生成的“双链”仅含有局部单链，其杂合率小于100%。因此，杂合率越高，表示两个DNA之间碱基序列的相似性越高，它们之间的亲缘关系也就越近。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA-DNA杂交许多资料表明，DNA-DNA杂交最适合于微生物种一级水平的研究。1981年，约翰逊的实验指出，DNA-DNA杂交同源性在60%以上的菌株可以视为同一个种，同源性低于20%者为不同属的关系，同源性在20%-30%可以视为属内紧密相关的种。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA-rRNA杂交在生物进化过程中，rRNA碱基系列的变化比基因组慢，它甚至保留了古老祖先的一些碱基序列。所以，当两个菌株的DNA-DNA杂交率很低或者不能杂交时，用DNA-rRNA杂交仍可能出现比较高的杂交率，因而可以用来进一步比较关系更远的菌株之间的关系，进行属或属以上等级分类单元的分类。

34请输入您的文字对实际情况进行说明DNA-rRNA杂交DNA-rRNA杂交的基本原理，实验方法同DNA杂交一样，不同的是1.DNA杂交中同位素标记的部分是DNA，而DNA-rRNA杂交的同位素标记的部分是rRNA。2.DNA杂交结果用同源性百分比数表示，而DNA-rRNA杂交结果用Tm（e）和RNA结合数表示。

34请输入您的文字对实际情况进行说明16SrRNA（16SrDNA）寡核苷酸的的序列分析16SrRNA普遍存在于原核生物（真核生物中其同源分子是18SrRNA）中。16SrRNA分子中既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因此它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。16SrRNA的相对分子质量大小适中，约1540个核苷酸，便于序列分析。因此，它可能作为测量各类生物进化和亲缘关系的良好工具。

34请输入您的文字对实际情况进行说明16SrRNA（16SrDNA）寡核苷酸的的序列分析应用16SrRNA核苷酸序列分析法进行微生物分类鉴定，首先要将微生物进行培养，然后提取并纯化16SrRNA，进行16SrRNA序列测定，将所得序列通过Blast程序与Geneb