微生物的分离纯化食品微生物97课件.pptVIP

GXNZYGUANGXIAGRICULTURALVOCATIONALANDTECHNICALCOLLEGEGXNZYGUANGXIAGRICULTURALVOCATIONALANDTECHNICALCOLLEGE食品微生物食品微生物微生物的分离纯化一、目的要求学习从混杂的微生物群体中分离与纯化微生物菌种的方法。综合练习微生物学实验的各种无菌操作技术二、基本原理自然界中各种微生物混杂生活在一起，即使取很少量的样品也是许多微生物共存的群体。人们要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。微生物的分离、纯化技术是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。微生物的平板分离纯化技术自1880年被发明以来以有100多年的历史，该技术的建立和发展为人类获得丰富的微生物资源以及在工、农、医、环境、动物细胞培养等方面的应用作出了巨大的贡献。平板稀释涂布、平板稀释混合、平板划线法是分离和纯化微生物的常规方法。分离纯化技术其实是进行平板接种，即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。平板接种的目的是观察菌落形态，分离纯化菌种，活菌计数及在平板上进行各种实验时采用的一种接种方法。本实验是利用分离纯化技术来获得三大类微生物的平板纯培养物，为下次实验微生物的形态观察提供菌落形态的部分（形态观察主要包括群体形态（菌落形态）和个体形态观察两个方面。三、实验材料1、各组所需物品：无菌培养皿：两包，12套无菌三角玻扒：1支无菌吸管：3支接种器具：酒精灯，镊子，消毒棉球，打火机，标签贴纸，圆珠笔，一次性口罩，纸巾。制平板的培养基：肉汤琼脂培养基（1瓶）,麦芽汁琼脂培养基（1瓶）(于杀菌锅里保温)2、平板的制备：将融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于45℃时，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在酒精灯火焰旁进行，右手掌心握住三角瓶的底部，左手打开三角瓶棉塞，以右手的无名指和末指夹持瓶塞，灼烧瓶口。左手拿培养皿，用左手的大拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向皿内注入培养基（约15mL,厚度约0.5mL左右），迅速盖好皿盖。左手持培养皿稍加旋转摇动，使培养基均匀分布于整个培养皿底部，然后平置于桌面水平位置,待凝后即为平板。四、实验内容1.土壤稀释液的制备四、实验内容2.平板混合分离法：将土壤悬液分离样品摇匀，用无菌移液管取1ml的菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至50℃左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15ml，摇匀，凝固，制成平板。混合倒平板操作法示意图四、实验内容3.平板划线分离法：将土壤稀释样品摇匀，以无菌操作用接种环直接取试管中待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约30℃）伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线，划线时平板面与接种环面成30-40℃，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线,接种环不要嵌入培养基内划破培养基,线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。四、实验内容平板划线分离操作法示意图平板划线菌落分离效果图4.平板涂布分离法(3皿)：将0.1ml土壤稀释液小心地滴在平板培养基表面中央位置。右手拿无菌三角玻扒在平板培养基表面上,将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直来回推动,平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。涂布平板操作法示意图四、实验内容5.生物的培养技术：培养箱恒温培养法细菌于37℃恒温培养箱培养1-2d，平板倒置培养。霉菌和酵母菌于32℃恒温培养箱培