初识高效液相色谱法ThefirstknowledgeofH.pptx

农用化工产品品质检验液相色谱知识点之——初识高效液相色谱法ThefirstknowledgeofHPLC制作者：徐瑾

发展1ChromatographyTsvethadmanagedtoseparateamixtureofplantpigments,includingchlorophyll,onacolumnpackedwithfinelygroundcalciumcarbonate,usingpetroleumetherasthemobilephase.Asthecoloredmixturepasseddownthecolumn,itseparatedintoindividualcoloredbands(thetermchromatographycomesfromtheGreekwordschroma,meaningcolor,andgraphein,meaningwriting,ordrawing).thestationaryphasethemobilephase

发展2HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC

比较3与经典液相色谱法相比经典LCHPLC固定相颗粒100μm,不均匀固定相颗粒10μm,均匀常压下输送流动相高压下输送流动相柱效较低（H↑，n↓）柱效较高（H↓，n↑）分析周期长分析周期短无法在线检测可以在线检测

比较4与气相色谱法相比分析对象及范围流动相的选择分离原理操作条件GC能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20%流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小依据吸附、分配两种原理进行样品分离加温常压操作HPLC溶解后能制成溶液的样品，高沸点、高分子量、难气化、离子型的稳定或不稳定化合物，占有机物的80%流动相为液体或各种液体的混合。它除了起运载作用外，还可通过溶剂来控制和改进分离。依据吸附、分配、筛析、离子交换、亲和等多种原理进行样品分离，可供选用的固定相种类繁多。室温、高压下进行均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测

概述5高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。“三高一广一快”HighpressureHighperformanceHighsensitivityWiderangeofapplicationFastanalysisspeedThecharacteristicsofHPLC

分类6ThecharacteristicsofHPLC分析结果重复性高色谱柱可反复使用样品不被破坏、易回收缺点是有“柱外效应”extra-column?effect

分类7ClassificationofHPLC

分类8吸附色谱法AdsorptionChromatography以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。

分类9分配色谱法PartitionChromatography键合相色谱法Bonded-phasechromatograph分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。

分类10离子色谱法IonChromatography离子对交换色谱法是以离子交换剂为固定相的色谱方法，组分因和离子交换剂亲和力的不同而被分离。柱填料含有极性可离子化的基团，如羧酸、磺酸或季铵离子，在合适的PH值下，这些基团将解离，吸引相反电荷的物质。由于离子型物质能与柱填料反应，所以