油脂脂肪酸组成的测定外标法归一化法73课件.pptxVIP

油脂脂肪酸组成的测定——外标法、归一化法主讲教师：王旭峰农产品食品检验员

2学习目标掌握外标法、归一化法测定脂肪酸组成的基本原理；掌握外标法、归一化法测定脂肪酸组成中试样制备方法；掌握脂肪酸组成测定中试样前处理的方法；掌握脂肪酸组成测定中数据处理及计算方法；掌握脂肪酸组成测定过程中的注意事项。

3一、测定原理水解-提取法：试样经水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后，在碱性条件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，经毛细管柱气相色谱分析，外标法定量测定脂肪酸的含量。动植物油脂试样不经脂肪提取，直接进行皂化和脂肪酸甲酯化。酯交换法(适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂)：将油脂溶解在异辛烷中，加入氢氧化钾甲醇溶液通过酯交换甲酯化，反应完全后，用硫酸氢钠中和剩余氢氧化钾,外标法定量测定脂肪酸的含量。乙酰氯-甲醇法(适用于含水量小于5%的乳粉和无水奶油试样):乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸-甲醇使其中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化，用甲苯提取后，经气相色谱仪分离检测，外标法定量。

4二、试剂与材料（一）试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。1.盐酸(HCl)。2.氨水(NH3·H2O)。3.焦性没食子酸(C6H6O3)。4.乙醚(C4H10O)。5.石油醚：沸程30℃~60℃。6.乙醇(C2H6O)(95%)。7.甲醇(CH3OH)：色谱纯。8.氢氧化钠(NaOH)。

5二、试剂与材料（一）试剂9.正庚烷[CH3(CH2)5CH3]：色谱纯。10.三氟化硼甲醇溶液,浓度为15%。11.无水硫酸钠(Na2SO4)。12.氯化钠(NaCl)。13.无水碳酸钠(Na2CO3)。14.甲苯(C7H8):色谱纯。15.乙酰氯(C2H3ClO)。16.异辛烷[(CH3)2CHCH2C(CH3)3]:色谱纯。17.硫酸氢钠(NaHSO4)。18.氢氧化钾(KOH)。

6二、试剂与材料（二）试剂配制1.盐酸溶液(8.3mol/L)：量取250mL盐酸，用110mL水稀释，混匀，室温下可放置2个月。2.乙醚-石油醚混合液(1+1)。3.氢氧化钠甲醇溶液(2%)。4.饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠溶解于1.0L水中，搅拌溶解，澄清备用。

7二、试剂与材料（二）试剂配制5.氢氧化钾甲醇溶液(2mol/L)：将13.1g氢氧化钾溶于100mL无水甲醇中，可轻微加热，加入无水硫酸钠干燥，过滤,即得澄清溶液。6.乙酰氯甲醇溶液(体积分数为10%)：量取40mL甲醇于100mL干燥的烧杯中，准确吸取5.0mL乙酰氯逐滴缓慢加入，不断搅拌，冷却至室温后转移并定容至50mL干燥的容量瓶中。临用前配制。注：乙酰氯为刺激性试剂，配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌防止喷溅，注意防护。

8二、试剂与材料（二）标准品与标准溶液配制（1）脂肪酸甘油三酯标准品：纯度≥99%。（2）单个脂肪酸甲酯标准溶液。将单个脂肪酸甲酯分别从安瓿瓶中取出转移到10mL容量瓶中，用正庚烷冲洗安瓿瓶，再用正庚烷定容，分别得到不同脂肪酸甲酯的单标溶液，贮存于-10℃以下冰箱，有效期3个月。（3）脂肪酸甘油三酯标准工作液：根据试样中所要分析脂肪酸的种类选择相应甘油三酯标准品，用甲苯配制适当浓度的标准工作液，于-10℃以下的冰箱中保存，有效期3个月。

9三、仪器设备（1）匀浆机或实验室用组织粉碎机或研磨机。（2）气相色谱仪。具有氢火焰离子检测器（FID）。（3）毛细管色谱柱。聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相，柱长100m，内径0.25mm，膜厚0.2μm。（4）恒温水浴。控温范围40~100℃控温精度±1℃。（5）分析天平。感量0.1mg。（6）离心机：转速≥5000r/min。（7）旋转蒸发仪。（8）螺口玻璃管(带有聚四氟乙烯做内垫的螺口盖)：15mL。（9）离心管：50mL。

10四、操作流程制备样品→称样→水解试样→提取油脂→制备脂肪酸甲酯→色谱分离→结果计算五、测定步骤（一）制备试样固体或半固体试样使用组织粉碎机或研磨机粉碎，液体试样用匀浆机打成匀浆，-18℃以下冷冻保存。测定时，将其解冻后使用。

11五、测定步骤（二）试样前处理（水解-提取法）1.试样的称取称取0.1~10g（精确至0.1mg，约含脂肪100~200mg）均匀试样于250mL平底烧瓶中，加入约100mg焦性没食子酸、几粒沸石、2mL95%乙醇、混匀。根据试样的类别选取不同的水解方法。

12五、测定步骤2.水解试样根据试样的类别选取相应的水解方法。（1）酸水解于试样中加入10mL盐酸溶液，混匀。将烧瓶放入70~80℃水浴中水解40min。每隔10min振荡一次烧瓶，使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入溶液中。水解完成后，取出烧瓶冷却至室温。乳粉及液态乳碱水解法乳酪