第十三章分光光度法基础化学.pptVIP

四、相关计算1.A=-lgT=-lgIt/I0=ε·b·c2.ε～a～ε=aMBa=0.1E1cm1%E1cm1%E1cm1%=10×ε/MB第30页，共43页，星期日，2025年，2月5日例1：已知Fe2+?：500μg·L-1b：2cmA：0.19(λ508nm）求ε?解：c(Fe2+)==8.9×10-6mol·L-1A=εbc500×10-655.85ε=Ab·c=1.1×104(L·mol-1·cm-1)=0.19/(2×8.9×10-6)第31页，共43页，星期日，2025年，2月5日第1页，共43页，星期日，2025年，2月5日1.光的性质及物质对光的选择性吸收(了解)2.分光光度法的基本原理,Lambert-Beer定律及有关计算(掌握)3.分光光度计的基本构造,熟悉标准曲线法(了解)4.提高测量灵敏度和准确度的方法(了解)5.紫外分光光光法的一般概念(了解)本章内容第2页，共43页，星期日，2025年，2月5日▲分光光度法的基本原理及Lambert-Beer定律▲可见分光光光法的测量方法。-----重点第3页，共43页，星期日，2025年，2月5日分光光度法（spectrophotometry)定义：根据物质的吸收光谱及光的吸收定律对物质进行定性、定量分析的一种方法原理：吸收光谱～物质结构的内部特征定量分析：确定某一成份或某一化合物存在多少定性分析：确定某一成份某一化合物是否存在第4页，共43页，星期日，2025年，2月5日分光光度法的分类光源波长范围(nm)类型380~780可见分光光度法200~380紫外分光光度法780~3×105红外分光光度法第5页，共43页，星期日，2025年，2月5日分光光度法特点：▲灵敏度高:10-5~10-6mol/L最低浓度▲准确度较高▲操作简便、快速▲应用广泛第6页，共43页，星期日，2025年，2月5日分光光度法的应用例：阿司匹林（乙酰水杨酸）片剂中水杨酸的鉴别阿司匹林易吸收空气中的水份而水解产生水杨酸，而水杨酸容易刺激胃。国家药监局规定：水杨酸的含量≤0.1％紫外分光光度法，在λmax=312nm处进行测定第7页，共43页，星期日，2025年，2月5日例2：紫外分光光度法广泛用于生物试样中蛋白质（λmax=280nm），核酸的纯度分析（λmax=260nm）例3：食品(果酱、果汁、肉制品)中苯甲酸盐、山梨酸盐含量的测定山梨酸盐等常用作食品添加剂以抑制酵母和霉菌的生长,食品工业上对其用量一般有严格限定(如：果酱≤0.1％)苯甲酸盐的石油醚溶液(λmax=225nm)处有最大吸收峰；山梨酸盐的石油醚溶（λmax=250nm）处有最大吸收峰。第8页，共43页，星期日，2025年，2月5日第一节物质的吸收光谱第9页，共43页，星期日，2025年，2月5日1、光的基本性质光是一种电磁波，具有波粒二象性。光的波长（λ）、频率（ν）与速度（c）的关系如下：E=hν=hc/λc＝λν波长短，能量大，穿透力强；波长长，能量小，穿透力弱。一、物质对光的选择性吸收第10页，共43页，星期日，2025年，2月5日2.物质对光的选择性吸收▲物质对光的吸收具有选择性例：石英可见光几乎不吸收光学：▲物质对光的吸收是物质的普遍性质红外光强烈吸收第11页，共43页，星期日，2025年，2月5日物质对光的吸收是物质(分子、原子、离子等)与辐射能相互作用的一种形式，只有当入射光的能量同吸光物质的基态和激发态能量差相等时才会被吸收物质对