生物分离与提纯项目七凝胶层析72课件.pptxVIP

生物分离与提纯项目七凝胶层析

目录Contents01任务一认识凝胶层析1任务二常用凝胶2任务三凝胶层析操作方法3任务四凝胶色谱技术的应用4

09任务二常用凝胶

10典型的凝胶类型葡聚糖凝胶Sephadex琼脂糖凝胶Sepharose聚丙烯酰胺凝胶Bio?Gel其他，羟丙基葡聚糖凝胶、交联琼脂糖凝胶、多孔玻璃珠、多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等。三维空间网状结构的凝胶

11葡聚糖凝胶（Sephadex）具有良好的化学稳定性，是目前生化产品制备中最常用的凝胶。基本骨架：葡聚糖（dextran）;交联剂：3-氯-1,2-环氧氯丙烷使葡聚糖之间通过醚键交联聚合而成的三维空间网状结构葡聚糖凝胶网孔大小可通过调节交联剂和葡聚糖的配比及反应条件来控制。交联度越大，网孔越小，吸水膨胀就越小。交联度越小，网孔越大，吸水膨胀就越大葡聚糖凝胶SephadexG系列凝胶的分级范围G10700DG151,500G251,000~5,000G-501,500~30,000G-753,000~70,000G1004,000~150,000G1505,000~400,000G2005,000~800,000葡聚糖凝胶的化学结构

12葡聚糖凝胶的外观为白色珠状颗粒。它带有大量的羟基，亲水性好，因此在水溶液或电解质溶液中极易膨胀。稳定性，对碱比较稳定，在强酸性环境中其糖苷键易水解吸附性，对碱性蛋白有吸附作用，提高离子强度即可解决（含NaCl的缓冲液）交联度不同，型号不同，膨胀度和吸水量不同，孔径大小和分级范围也不同；商业用的型号又G10、G15、G25，G100等，数字代表每g干凝胶吸水量×10，如G50即表示每克干凝胶的吸水量为5.0毫升；数字越小，分级范围窄，适合低分子量的蛋白质的分离；数字越大，适合宽范围分子量的分级。葡聚糖凝胶

13琼脂糖凝胶（商品名为Sepharose)琼脂糖是从琼脂中分离出来的。在制备过程要将其中含硫酸根和羧基基团的琼脂胶除去，得到不带电荷基团的琼脂糖。琼脂糖是由D-半乳糖和3、6脱水的L-半乳糖连接构成的多糖链。这种多糖链在100℃左右时呈液态，当温度下降到45℃以下时呈固态。它们之间以氢键方式相互连接就成了线性的双链单环的琼脂糖，经凝聚即呈束状的琼脂糖凝胶。

14对尿素和盐酸胍等破坏氢键的试剂有较强的抵抗力，pH4.0～9.0的缓冲液稳定。琼脂糖凝胶室温保存，其物理稳定性超过了聚丙烯酰胺和葡聚糖凝胶。琼脂糖凝胶在干燥状态下保存时易破裂，故一般存放在含防腐剂的水溶液中，同时还要避免剧烈的搅动。琼脂糖凝胶按其浓度来分有Sepharose2B(2％)、4B(4％)和6B(6％)，Sepharose6B的机械强度大于2B，但是筛孔小于2B。琼脂糖凝胶的机械强度和筛孔的稳定性都比葡聚糖凝胶好。用琼脂糖凝胶进行柱层析时，流速可以快些。

15商品名Sepharose（瑞典）琼脂糖与1，3－二溴异丙醇反应生成交联琼脂糖，稳定性提高；型号2B,4B，数字代表颗粒中琼脂糖的百分含量，数字越大，分离的范围优点：琼脂糖凝胶比葡聚糖凝胶和生物胶的排阻范围大，可达相对分子质量108，使凝胶层析的分离区间扩大到大分子和病毒颗粒；机械性能好。缺点：不耐酸碱，最好将条件控制在pH4～9之间，温度0～40℃，超出此范围,可能被破坏。与葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶相比，琼脂糖凝胶机械强度和筛孔稳定性好，洗脱速度可以快些。二、琼脂糖凝胶

16聚丙烯酰胺凝胶的商品名称为Bio-gel。它是以甲撑双丙烯酰胺(双体)作交联剂，以过硫酸铵作催化剂，丙烯酰胺与甲叉双丙稀酰胺交联，过硫酸铵为催化剂，TEMED加速剂。改变交联剂的浓度，可以改变孔隙，交联剂越多，孔隙越小；常用型号P?2和P?300，数字×103为分离的分子量极限聚丙烯酰胺凝胶的分离范围、吸水率等性能基本近似于Sephadex。排阻极限最大的Bio?GelP?300为4×105耐酸，pH1～10稳定，耐受变性剂（尿素、胍盐等）三、聚丙烯酰胺凝胶

17种类（商品名）商品型号型号中数字意义排阻限度稳定性葡聚糖凝胶（Sephadex）G15，G25，G100…每g的吸水量(ml)×10数字越大，筛