项目一基本概念灭菌杀死物体表面及内部一切微生物的方法分杀菌.pptVIP

项目四消毒与灭菌技术项目一、基本概念灭菌：杀死物体表面及内部一切微生物的方法。分杀菌和溶菌消毒：杀死物体表面或内部的部分微生物，而对被消毒物品基本无害的方法。如巴氏消毒法防腐：使微生物暂时处于不生长、不繁殖、但又未死亡的状态。如低温、干燥、盐渍等。除菌：用冲洗、过滤、离心、静电吸附等机械手段，除去微生物的方法。化疗：利用对病原菌具有高度毒力，而对机体本身无毒害作用的化学物质，杀死或抑制病原微生物的方法。如抗生素、磺胺类药物。物理方法：高温灭菌、紫外线灭菌、过滤灭菌化学方法：化学药剂杀菌。如甲醛、氯、高锰酸钾等。项目二高温灭菌1、湿热灭菌2、干热灭菌1、湿热灭菌利用饱和热蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌，是湿热灭菌的一种。利用水的沸点随水蒸汽压力的增加而上升以达到高温灭菌目的的方法。一般培养基0.1MPa，20-30min，含糖培养基为0.05MPa，30min。1.培养基的高压蒸汽灭菌①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。②将灭菌锅盖的排气管插入套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。③打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5～10min，关闭放气阀。④关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，当温度升至121oC，压力达0.1MPa时，保持20～30min，即达到灭菌目的。⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。⑥打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。2.干热灭菌法：（1）火焰灭菌：酒精灯、接种环（2）干燥空气箱灭菌常用于空玻璃器皿的灭菌，但凡带有橡胶或塑料的物品、液体及固体培养基等，都不能用于干热法灭菌。进行灭菌时，先将要灭菌器皿(培养皿、吸管的包装方法见示范)包好，放入电热烘箱内，调节温度至160～170oC，维持1～2h(当温度升至80oC以上切勿打开烤箱，以免引起玻璃器皿破裂和火灾)。灭菌后，当温度降至30～40oC时，打开箱门，取出灭菌器皿。射线灭菌适于表面灭菌和无菌室、培养室空间灭菌。紫外线、电磁波、日光、电离辐射（α、β、γ射线等），因紫外线穿透力低，只能用于表面灭菌，对固体物料灭菌不彻底，不能用于液体灭菌。如微波炉过滤除菌澄清液体或气体的除菌。如制无菌空气。一般不能用于病毒、支原体、L型细菌等的除菌。过滤介质：棉花、活性炭、超细纤维过滤纸、硝酸纤维素等制成的滤膜。三、化学因素（一）化学消毒剂氧化剂：高锰酸钾、过氧化氢、过氧乙酸、84消毒液、次氯酸钙（漂白粉）等有机化合物：酚类(苯酚）、醇类（70%—75%）、醛类（40%甲醛，福尔马林）、表面活性剂重金属盐：二氯化汞（二）治疗剂如抗生素等几种培养基的配制根据配制培养基的步骤,按下列培养基配方配制培养基。1.牛肉膏蛋白培养基(W/V)(培养细菌用)牛肉膏0.3g琼脂2.0g蛋白胨1.0g蒸馏水100MLNaCl0.5gpH7.2-7.42.马铃薯(PDA)培养基(W/V)(培养霉菌用)马铃薯20g蒸馏水100mL蔗糖2.0gpH自然琼脂2.0g马铃薯汁制备：将马铃薯去皮，称量所需重量，切成小块,加水煮沸30min,纱布过滤，补足水量。3.高氏1号(W/V)(培养放线菌用)可溶性淀粉2.0gFeSO40.001gK2HP040.05g琼脂2.0gMgS04·7H200.05g蒸馏水100mLKNO30.1gpH7.6-7.8NaCl0.05g配制时，先用少量蒸馏水将可溶性淀粉调成糊状，在沸水浴中搅拌，煮融，再加入其他成分，补足水量，0.1MPa压力，灭菌20min.配制培养基注意事项1.加热溶化过程中，要不断搅拌，以免琼脂或其他固体物质粘在烧杯底上烧焦，造成烧杯破裂，加热过程中所蒸发的水分应补足。2.pH值必须按各种不同培养基的要求准确测定。3.所