有机物定量分析.pptVIP

常用的混合糖的分离纯化方法一.提取常用溶剂有：水和乙醇，在提取糖类时，先将样品磨碎浸泡成溶液，若有脂肪的样品用石油醚提取，撤去其中的脂肪和叶绿素。1.?????水作提取剂用水作提取剂，温度控制在45-50℃，利用水作提取剂时，还有pro、氨基酸、多糖、色素干扰，影响过滤时间，所以用水作提取剂应注意：1）温度过高：是可溶性淀粉及糊精提取出来。2）酸性样品：酸性使糖水解（转化），所以酸性样品用碳酸钙中和，提取但应控制在中性。3）萃取的液体：有酶活性时，同样是使糖水解，加二氯化汞可防止（二氯化汞可抑制酶活性）2.乙醇（水溶液）作提取液乙醇作提取液适用于含酶多的样品，这样避免糖被水解。乙醇的浓度70-80％。浓度过高，糖溶在乙醇中，用乙醇的目的，降低酶的作用，避免糖被酶水解。第30页，共76页，星期日，2025年，2月5日二.澄清剂1.?作用：?沉淀一些干扰物质，使提取液清亮透明，达到准确的测量糖类。（常用澄清剂来澄清）2.????对澄清剂的要求：1）除干扰物质完全，不吸附被测物质糖2）过量澄清剂不影响糖的测量3）沉淀颗粒要小，操作简便4）不改变糖类的比旋光度及理化性质3.???实验室常用的澄清剂1）中性醋酸铅：适用于植物性的萃取液，它可除去蛋白质、丹宁、有机酸、果胶。缺点：脱色力差，不能用于深色糖液的澄清，否则加活性炭处理。???2）碱性醋酸铅适用深色的蔗糖溶液，可除色素，有机酸，蛋白质缺点：沉淀颗粒大，可带走果糖。（3）醋酸锌和亚铁氰化钾?用于富含蛋白质的提取液，常用于沉淀蛋白质，对乳制品最理想。主要是生成的亚铁氰酸锌（白色沉淀）与蛋白质共同沉淀。所以使动物性样品的沉淀剂。（4）Al(OH)3乳剂是辅助澄清剂。（5）CuSO4-NaOH这种澄清剂用于牛乳等样品。*第31页，共76页，星期日，2025年，2月5日4．澄清剂的用量在一般操作时，加澄清剂量多少一定要恰当，用量太少，达不到澄清的目的，用量太多使分析结果产生误差，不同的物质，因干扰物质种类和含量的不同，所以添加量也不同。过量以后，糖液中有Zn2+,?Pb2+,等。过量的Pb2+还原糖生成铅糖。这样使测得糖量降低。所以要加除铅剂，防止生成铅糖，降低糖的浓度。三．常用的除铅剂??K2CrO4(苯酸钾)；Na2CrO4(苯酸钠)；Na2HPO4(磷酸氢二钠)；Na2SO4(硫酸钠)；[使用时可加少量固体即可]第32页，共76页，星期日，2025年，2月5日糖的测定方法对于糖的测定方法有很多，大致可分为三类1.物理法，（1.旋光法,?2.折光法,?3.比重法,）2.物理化学法,(1.点位法,2极普法,3.光度法,4.色谱法)3.化学方法,(1.斐林氏法.2.高锰酸钾法.3.碘量法.4.铁氰化钾法.5.蒽铜比色法.6.咔唑比色法)共计三大种，在测定其他碳水化合物时，往往是使其水解为糖再进行测定。第33页，共76页，星期日，2025年，2月5日还原糖是指具有还原性的糖类。葡萄糖分子中含有游离醛基、果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的潜醛基，它们都是还原糖。其他双糖（如蔗糖）、三糖乃至多糖（如糊精、淀粉等），其本身不具还原性，属于非还原性糖，但都可以通过水解而生成相应的还原性单糖，测定水解液的还原糖含量就可以求得样品中相应糖类的含量。因此，还原糖的测定是一般糖类定量的基础。还原糖的测定方法很多，其中最常用的有直接滴定法、高锰酸钾滴定法、萨氏法、碘量法等。(一)还原糖的测定第34页，共76页，星期日，2025年，2月5日一．原理将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。各步反应式(以葡萄糖为例)如下：直接滴定法第35页，共76页，星期日，2025年，2月5日从上述反应式可知，1mol葡萄糖可以将6molCu(2+)还原为Cu(+1)。实际上两者之间的反应并非那么简单,实验结果表明．1mol葡萄糖只能还原5mol多点的Cu(2+)，且随反应条件而变化。因此，不能据上述反应