出发菌株的准备96课件.pptxVIP

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出发菌株的准备

利用物理、化学等诱变剂处理均匀而分散的微生物细胞群,在促进其突变率显著提高的基础上,采用简便、快速高效的筛选方法从中挑选出少数符合目的的突变株,以供科学实验和生产实践用。方法简便易行、条件和设备要求简单。诱变育种具有极其重要的实践意义。在当前发酵工业中,大部分菌种为诱变而产生的变异菌株。

诱变育种的基本过程选择合适的出发菌株制备待处理的菌悬液诱变处理筛选保藏和扩大试验

出发菌株——用来育种处理的起始菌株

◆出发菌株应具备

①对诱变剂的敏感性高;

②具有特定生产性状的能力或潜力;

出发菌株最好已具备一些有利的性状,如生长速度快、营养要求低和产孢子早而多。1.出发菌株的选择

出发菌株的来源

①自然界直接分离到的野生型菌株:DNA未损伤,但生产性能通常很差。通过诱变育种正突变的可能性大。

②历经生产考验的菌株:已有一定的生产性状,对生产环境有较好的适应性,正突变的可能性也很大。

③已经历多次育种处理的菌株:DNA已有较大的损伤,产量形状已经达到了一定水平。负突变的可能性大,继续诱变处理可能导致产量下降。一般可选择①或②类菌株,第②类更佳。在抗生素生产菌育种中,最好选择已通过几次诱变并发现每次效价都有所提高的菌株作为出发菌株。

2.制备细胞悬液要求①菌体处于对数生长期,并使细胞处于同步生长;

②细胞分散且为单细胞。液体物理诱变剂——生理盐水(0.85%NaCl)化学诱变剂——缓冲液

前培养:细菌类培养至对数生长中后期;产孢子的微生物培养孢子至大多数刚刚萌发。方法:细菌、酵母:液体培养→离心洗涤→生理盐水制备菌悬液→放入锥形瓶内震荡(内有玻璃珠)→无菌脱脂棉过滤→计数→调整细胞悬液浓度108个/mL产孢子微生物:斜面培养孢子→灭菌蒸馏水洗下孢子→转入锥形瓶内震荡(内有玻璃珠)→无菌滤膜过滤(孔径为孢子直径的1-2倍)→计数→调整孢子悬液浓度107个/mL

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