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光度测定法BET检查技术湛江安度斯生物有限公司2009年3月

光度测定法方法学分类光度测定法原理终点比色法BET动态比浊法BET

1、光度测定法方法学分类2025/7/17Page3动态浊度法动态显色法(比浊法)01显色法光度测定法（定量法检测）02(比色法)浊度法03终点显色法终点浊度法

2、光度测定法原理2025/7/17Page4光电转换原理光度测定法是利用鲎试剂与内毒素的混合物在反应过程的透光度变化与内毒素浓度的关系来定量检测内毒素的一种方法。当一束光线进入如下光电转换装置时，该装置将产生电流I，我们称I为透光强度。入射光反应混合物透射光光电池I透光容器

设：初始时的透光强度为Is，某时刻的透光强度为It

定义1：透光度（Rt）：

Rt=It/Is(%)初始时It=Is，Rt=100%，Rt曲线变化趋势是由高至低。定义2：吸光度(OD)：OD=-lg(It/Is)初始时It=Is，OD=0，OD曲线变化趋势是由低至升高。选择不同的参数(Rt或OD)将得到不同变化趋势的动态曲线。T(分)IsItIeI

TAL与内毒素反应的动态曲线(Rt-T曲线)以透光度（Rt）为纵座标，时间（T）为横座标，把TAL与内毒素反应引起反应混合液透光度的变化连续地描绘在座标系中，便得到该反应的动态曲线如图：2025/7/17Page6Rt（%）T（分）动态曲线100孕育期反应期结束

TAL与内毒素反应的动态曲线(OD-T曲线)2025/7/17Page7以吸光度（OD）为纵座标，时间（T）为横座标，把TAL与内毒素反应引起反应混合液吸光度的变化连续地描绘在座标系中，便得到该反应的动态曲线如图：ODT（分）动态曲线0孕育期反应期结束

动态曲线的特点2025/7/17Page8把标准内毒素制备成三个浓度C1、C2、C3（C1C2C3），分别与TAL反应，描绘出反应的动态曲线如下图：C3Rt（%）T（分）C2C1分析动态曲线可看出：内毒素浓度越高，孕育期越短；内毒素浓度越高，反应期曲线越陡；内毒素浓度越高，进入结束期越快。

光度测定法BET试验的相关变量2025/7/17Page9C3100Rt（%）T（分）C2C1相关变量：

?内毒素浓度(C)

?透光度(Rt或OD)

?反应时间(T)

1）动态法原理固定透光度(Rt)，建立内毒素浓度与反应时间关系的标准曲线（C-T曲线），用供试品的反应时间比对标准曲线，得出供试品的内毒素浓度。这里的反应时间是指反应混合液的透光度到达预设透光度值（Rt）的时间。2025/7/17Page10回归分析Rt%预设透光度值R0T1T2T392100T(分)C1C2C3LgT=b-kLgCLgTT3T2T1C3C2C1LgC（1）建立标准曲线

（2）测定样品内毒素浓度（Cs）2025/7/17Page11用鲎试剂与未知内毒素含量的供试品(S)反应，得到反应时间Ts，比对C-T关系的标准曲线，可得出供试品的内毒素含量Cs。比对标准曲线TsT(分)Rt(%)R0CsLgT=b-kLgCLgCCsTsLgT92

2）终点法原理固定反应时间（T），建立内毒素浓度与透光度关系的标准曲线（C-Rt曲线），用供试品的透光度比对标准曲线，得出供试品的内毒素浓度。2025/7/17Page12Rt(%)T(分)C1C2C3100R1R2R3预设反应终止时间T0RtR3R2R1C3C2C1Rt=b-K·C回归分析（1）建立标准曲线

（2）测定样品内毒素浓度（Cx）2025/7/17Page13用鲎试剂与未知内毒素含量的供试品（X）反应，得到透光度值Rx，比对C-Rt关系的标准曲线，可得出供试品的内毒素含量Cx。CxToT(分)Rx100Rt(%)Rt(%)Rt=b-K·CRxCx比对标准曲线

试验仪器及器具3、动态比浊法2025/7/17Page14动态微孔平板仪或试管仪BET软件微孔平板、反应试管等010203

英国LabKinetics公司ATi动态试管仪,96孔湛江安度斯公司开发的BET专用软件“生物探针-2002”

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