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荧光素流式细胞术杨培2014.02.11
荧光素介绍流式细胞术基本原理流式胞内因子的流式检测流式多色Panel设计流式细胞术的应用主要内容
荧光素介绍
荧光素（Fluorescein）是具有光致荧光特性的染料，荧光染料种类很多。荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。12荧光素介绍
荧光素介绍荧光素的激发和发射光谱任何发荧光的物质分子都具有这两个特征光谱（nm）激发光谱（Excitation，Ex）：是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线，也称为吸收光谱。吸收波峰（最大吸收波长）：Ex-Max发射光谱（Emission）：是指某一波长激发光引起荧光素发射的一定波长范围内的荧光发射波峰（最大发射波长）：Em-Max荧光素的使用：选择正确的激光器确定所需荧光探测器（PMT）488nm520nm异硫氰酸荧光素（FITC）
荧光素介绍Blue（488nm）FITCAlexaFluor488PEPerCPPerCP-Cy5.5PE-Cy5PE-Cy7PI7-AADRed（633nm）APCAPC-Cy7AF647AF700Violet（405nm）AmCyanBrilliantViolet421PacificBlueBrilliantViolet510BrilliantViolet570BrilliantViolet605BrilliantViolet650BrilliantViolet711BrilliantViolet785Qdot605UV(360nm）DAPI常用荧光素
荧光素光谱分析网络工具：
荧光素介绍
荧光素家族Alexa488Alexa488合成的有机物AlexaFluors,Cydyes,Horizon,Dylight,etc蛋白PE,APC,GFP,mCherry半导体纳米Qdots,Crystalplex,eFluorNC有机聚合物BrilliantVioletAlexa488PECy5Cy5Cy5
CollisionalQuenching荧光素淬灭
anti-MouseCD3e,clone145-2C11-PE/Cy5BioLegendCompetitor1耦合荧光素不同厂家，抗体荧光强度不同：F:P值不同耦合荧光素对光、对固定剂更敏感
耦合荧光素家族BrilliantVioletTM570BrilliantVioletTM605BrilliantVioletTM650BrilliantVioletTM711BrilliantVioletTM785PE-Cy7
BrilliantVioletTM荧光素家族BrilliantViolentTM简称“BV”，是诺贝尔奖获得者发明的“最新一代”的荧光染料，“BV”染料是有机聚合物，它有很强的光吸收能力（消光系数）和光转换能力（量子产率），这些物理特性使“BV”的亮度很强，更适合弱表达蛋白的检测。BrilliantViolentTM荧光素家族，包括：BV421，BV510,BV570，BV605，BV650，BV711，BV785七个成员，充分利用流式细胞仪405nm激发管，与其它各种荧光素兼容性好。Biolegend公司可以提供最新最全的BV系列荧光抗体，BD目前只推出了四种！
荧光素荧光强度激发光滤光片平行荧光素BrilliantVioletTM4215405nm450/50PacificBlueBrilliantVioletTM5104405nm510/50或525/50BDHorizon?V500和AmCyanBrilliantVioletTM5703405nm585/40PacificOrangeBrilliantVioletTM6055405nm605/12或510/20eFluor?605 和Qdot?605BrilliantVioletTM6504405nm660/20eFluor?650和Qdot?650BrilliantVioletTM7114405nm710/50eFluor?700NC和Qdot?705BrilliantVioletTM7853405nm780/60Qdot?800
荧光强度。（检测灵敏度及联接蛋白数量）01吸收光谱宽窄。（多色染色时不易漏光）02光稳定性。（光漂白）03Buffer稳定性。（PH值稳定）04机器兼容性。（激发光与接收光是否与大众化的机器相匹配）05荧
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