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1、池体积增大就增大了死体积。池体积大,使样品被流动相稀释,不仅降低了检测灵敏度,而且使峰变宽。2、池的结构也会影响峰展宽。一般检测池的体积应该小于色谱峰体积的十分之一。常规分析:检测池体积为8mL小体积高效柱:检测池体积应小于5mL微量色谱柱:检测池体积减小到1mL液相色谱检测器
-检测池对检测器的影响第127页,共161页,星期日,2025年,2月5日为应用最广的检测器,属于浓度敏感型检测器优点:1、灵敏度高,噪声低,线性范围宽2、对流动相基本无响应,受操作条件和外界环境变化影响小,流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱。3、对样品无破坏性,可以用于制备色谱或与其他检测器串连。4、结构简单,使用方便紫外检测器第128页,共161页,星期日,2025年,2月5日缺点:仅适用于测定有紫外吸收的物质流动相必须选择无紫外吸收特性的检测器紫外检测器第129页,共161页,星期日,2025年,2月5日紫外检测器原理:基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础:比耳定律,A=ξCL测量时一般选择在对样品有最大吸收的波长下进行,以获得最大的灵敏度和抗干扰能力,同时要考虑流动相的紫外吸收性质。第130页,共161页,星期日,2025年,2月5日紫外/可见光检测器EinEoutA=eCl=-log(Eout/Ein)lC:浓度朗伯-比尔定律(A:吸收)池第131页,共161页,星期日,2025年,2月5日紫外/可见光检测器样品池参比池光电二极管光电二极管EinEinEin光栅D2/W灯lEout第132页,共161页,星期日,2025年,2月5日一些常用溶剂的紫外截至波长紫外检测器紫外检测器流动相的选择第133页,共161页,星期日,2025年,2月5日影响紫外检测器噪声和漂移的因素灯能量光学元件气泡流动相和检测池温度变化泵的流量及压力波动紫外检测器第134页,共161页,星期日,2025年,2月5日泵工作示意图凸轮柱塞杆柱塞密封圈单向阀泵头流动相入口流动相出口第95页,共161页,星期日,2025年,2月5日单向阀结构抛光面球座宝石球单向阀工作原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头单向阀工作原理第96页,共161页,星期日,2025年,2月5日输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器单一或混合溶剂等度洗脱第97页,共161页,星期日,2025年,2月5日A泵进样器色谱柱柱温箱检测器B泵AB时间B浓度梯度洗脱第98页,共161页,星期日,2025年,2月5日梯度洗脱装置:高压梯度:用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度:在常压下将两种溶剂(或多元溶剂)混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。HPGE梯度混合器低压梯度比例阀LPGE高压常压高压/低压梯度系统常压高压第99页,共161页,星期日,2025年,2月5日分析时间长分离度差MeOH/H2O=6/4MeOH/H2O=8/2(column:ODS)使用梯度洗脱的原因当等度洗脱时:第100页,共161页,星期日,2025年,2月5日95%30%甲醇浓度在最短时间内获得最佳的分离使用梯度洗脱的原因当采用梯度洗脱时:第101页,共161页,星期日,2025年,2月5日梯度洗脱:优点:可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度注意事项:溶剂的纯度要高,否则梯度洗脱的重现性差梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测器或荧光检测器),而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器(如示差折光检测器)查看空白实验的数据遵守分析周期(最初的分析数据不采用)梯度洗脱要点第102页,共161页,星期日,2025年,2月5日1.使用流动相溶解样品--减少溶剂峰,尤其是组分峰靠近溶剂峰时尤为重要--保证样品在流动相中的溶解度,避免样品在系统中,尤其在柱中产生沉淀2.进样前最好使用0.45mm的滤膜进行过滤如果样品很脏,要使用
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