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种质离体保存;优选种质离体保存;种质资源保存方法;第一节概述;二、超低温保存的概念;但对植物而言,低温常常是指那些比常温稍低一些的温度。如

果低温超过细胞原生质所能忍受的临界温度,就会致使植物细胞遭

受冻害而死亡。如甜橙树发生冻害的临界温度通常在-6.5℃,枳壳

通常在-20℃左右(沈德绪等,1986)。;低温保存(Cryopreservation),是指将植物的组织或细胞经过防冻处理后,在低于-80℃条件下保存的方法。

超低温保存:将植物的组织或细胞经过防冻处理后,在-196℃的极端低温下保存的方法。;超低温保存的优点:;超低温保存的意义:;常用的超低温保存方法:

冷冻诱导保护性脱水的超低温保存法

玻璃化处理的超低温保存法;三、超低温保存的研究概况;12;第二节植物材料超低温冻存的细胞学基础;;根据Luyet的冻结理论(1937),细胞内游离水的冻结温度(-30℃)可认为是细胞冻存的安全温度,因而细胞冻存的两步冻结法一般以-30℃为基础的。

也就是说,控制细胞内外水的冻结状态,是细胞冻存技术的关键。;超低温保存的原理;5、保持培养细胞形态发生的能力。

冰冻保护剂(Cryoprotectiveagent,CPA)也称抗冻剂,为植物低温保存必不可少。

为此,对于不同的植物种类或材料,应筛选相应的冰冻保护剂,采用适当的降温速度及化冻方式,才能使细胞不受损伤或损伤最小。

1990,Kohmuraetal.

在超低温条件下,生命的代谢和衰老过程也基本停止,故能够实现长时期的保存。

经冻存的材料,不可避免地受到一些伤害,需要小心维护:

1.-2℃/min速度降温至-100℃后投入液氮,或以该速度一直降温至-196℃后投入液氮。

5M)渗透性化合物培养基上培养数小时至数天,再经过硅胶、无菌空气干燥脱水数小时(使含水量降至17~40%)或用藻酸盐包埋后投入液氮保存。

9、便于国际间的种质交换。

Takagietal.

胞中的水由游离水和束缚水组成,其中游离水约占90%,很容易

加冷冻防护剂(0℃)

桑树(Manihotesculenta)

百合(LiliumjaponicumThumb)

超低温保存:将植物的组织或细胞经过防冻处理后,在-196℃的极端低温下保存的方法。

可能是因为藻酸钙的包埋减轻了玻璃??溶液的毒性。

玻璃化处理的超低温保存法

种类:主要有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、葡聚糖(Dextrane)、聚乙二醇(PEG)、白蛋白(Albumin)、羟乙基淀粉(HES)等。;;第三节超低温保存的方法;一、传统的降温冰冻方法

1.-2℃/min速度降温至-100℃后投入液氮,或以该速度一直降温至-196℃后投入液氮。

在冰冻保保护剂的作用下,既可避免在细胞脱水时细胞内产生冰

晶,又能防止因溶质含量增加引起的“溶液效应”。因此,对于原生质

体、悬浮培养细胞等细胞类型一致的培养物,这种方法效果最好。;2.快冻法:将材料用玻璃瓶或锡箔纸袋保护后直接投入液氮或液氮的蒸气相中,该方法对高度脱水的材料如种子、花粉及抗寒性很强的休眠枝条或冬芽比较适宜,对含水量高的细胞培养物则不适合。;(加速继代、提高培养基渗透压、低温锻炼)

(c)将包埋体置于超净工作台上吹风干燥。

Martínez1999

(降温速度1000℃/min)

在超低温条件下,生命的代谢和衰老过程也基本停止,故能够实现长时期的保存。

超低温保存:将植物的组织或细胞经过防冻处理后,在-196℃的极端低温下保存的方法。

Mandal1995

超低温保存:将植物的组织或细胞经过防冻处理后,在-196℃的极端低温下保存的方法。

豆荚树(Acaciamangium)

葡萄(VitisvinifcraL.

慢速解冻:对于脱水处理后干冻保存的材料,一般认为应先置于0℃下一段时间,再于室温下缓慢解冻效果较好。

低温保存(cryopreservation)是由cryo和preservation组成,在

芦笋(Asparagusofficinalis);4.干冻法:将样品在高浓度(0.5-1.5M)渗透性化合物培养基上培养数小时至数天,再经过硅胶、无菌空气干燥脱水数小时(使含水量降至17~40%)或用藻酸盐包埋后投入液氮保存。该法特别适合于愈伤组织、体细胞胚、胚轴、胚、茎尖、生根苗保存,但不适用于脱水敏感的材料。;二、玻璃化保存方法

玻璃化(vitrification)是指液体转变为非晶体玻璃态的固化过程。

使溶液玻璃化有两条途径:一是大幅度提高冷却速率;二是增加溶液浓度。;

玻璃化法是指将生物材料经高浓度玻璃化溶液快速脱水

后,直接投入液氮,使材料连同玻璃化溶液同时转变成玻璃

态。在此过程中,水分子没

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