荧光定量PCR在临床医学中的应用.pptVIP

HBVDNA是病毒复制和传染性的直接标志。HBVDNA定量对于判断病毒复制程度、传染性大小、病毒药物疗效等有重要意义。HBVDNA拷贝数＝乙肝病毒载量第30页，共74页，星期日，2025年，2月5日HBVDNA检测的临床意义HBVDNA是HBV存在最直接的依据HBVDNA是HBV复制的标志HBVDNA是患者具有传染性的标志HBVDNA对乙肝两对半起补充作用HBVDNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBVDNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎第31页，共74页，星期日，2025年，2月5日提供直接证据缩短“窗口期”PCR检测“窗口期”核酸检测缩短的“窗口期”的天数HBV566-15HCV7041-60HIV2210-15有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断HBVDNA检测的临床意义第32页，共74页，星期日，2025年，2月5日HBVDNA检测的临床意义调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBVDNA来决定。第33页，共74页，星期日，2025年，2月5日HBVDNA检测方法斑点杂交（基本淘汰）定性PCR（基本淘汰）荧光定量PCR（主流）基因芯片（将来？）第34页，共74页，星期日，2025年，2月5日为什么建议病人要进行

HBVDNA检测？第35页，共74页，星期日，2025年，2月5日荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期血清标本Copies/mlHBeAg阳性慢性乙型肝炎病人8.3x108经α干扰素治疗后HBeAg转阴6.2x103非活动性HBsAg携带者血清5.6x103原先血中HBVDNA阳性，已痊愈超过12个月的血清103第36页，共74页，星期日，2025年，2月5日第37页，共74页，星期日，2025年，2月5日HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性？干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏。第38页，共74页，星期日，2025年，2月5日乙肝的治疗目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类：?干扰素：重组人α-1b干扰素、α-2a、α-2b干扰素等。核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。第39页，共74页，星期日，2025年，2月5日乙肝的治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等对于HBVDNA≥105的患者应进行抗病毒治疗第40页，共74页，星期日，2025年，2月5日拉米夫定可迅速降低HBVDNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻断肝纤维化的进程，终止肝硬化的发展。尤其是拉米夫定不受病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。此外拉米夫定还能抑制肝移植受体和AIDS病人体内的HBV复制。第41页，共74页，星期日，2025年，2月5日拉米夫定治疗人群有明显HBVDNA复制者前C区变异的慢性乙型肝炎代偿期的慢性乙型肝炎接受肝脏移植的患者干扰素治疗失败第42页，共74页，星期日，2025年，2月5日拉米夫定治疗效果绝大多数患者HBVDNA水平显著下降。用药4周开始下降，12至16周约半数以上的病例血清HBVDNA降到可检测水平以下。治疗1年后HBeAg阴转率约为20%。第43页，共74页，星期日，2025年，2月5日病毒学应答：HBVDNA低于检测下限血清学应答生化学应答组织学应答应用抗病毒药物后如何判断疗效？第44页，共74页，星期日，2025年，2月5日应用抗病毒药物后如何判断疗效？治疗结束时完全应答随访1年持续应答无应答第45页，共74页，星期日，2025年，2月5日YMDD变异YMDD：酪氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸蛋氨酸（M）突变为异亮氨（I）或缬氨酸（V）形成YIDD变异株或YVDD变异株。抗病毒治疗中存在的问题第46页，共74页，星期日，2025年，2月5日HBV-YMDD变异检测的临床意义动态检测：服用拉米夫定3个月开始，每月