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2025-07-25 发布于安徽
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HD交换反应研究蛋白质分子的折叠过程.ppt

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H/DExchangeLevelsofGasPhaseCytochromecIonsExcitedinaLinearQuadrupoleIonTrapH/D交换反应研究蛋白质分子的折叠过程

OutlineH/DexchangeInstrumentationResultsanddiscussionConstantpressureexchangeTime-resolvedexchangeConclusions

104A.A.+hemecMW=12314Dahas198totalexchangeablehydrogensA.A.SequenceGDVEKGKKIFVQKCAQCHTVEKGGKHKTGPNLHGLFGRKTGQAPGFTYTDANKNKGITWKEETLMEYLENPKKYIPGTKMIFAGIKKKTEREDLIAYLKKATNEJ.Biol.Inorg.Chem.1999,4,21.H/DExchangeofCytochromec

LinearIonTrap–TimeofFlightCampbelletal.RapidComm.MassSpec.1998,12,1463-1474.Collingsetal.RapidComm.MassSpec.2001,15,1777-1795.GasMCPFocusingLensesTOFAccelerationGrids360L/SQ0Q1SkimmerOrificeCurtainIonsN215L/SLITChamberTOFChamberQ0/Q1L1360L/S

H/DexchangeinaLinearIonTrapConstantD2OPressureH/DexchangeTime-resolvedH/DexchangeIonperturbationsOrifice-SkimmerActivationq-valueDipoleexcitationr0=4.1mml=20cm?=2?ff=768kHzVolume:4300cm3360L/SRFonlyQ0TrappingquadQ1Skimmer0.75mmOrifice0.25mmCurtainIonsN215L/SL1,0.7mm2mTorr2TorrQ0/Q1Gasinlet

Dipoleexcitation

ConstantD2OPressure(5mTorr)Cytochromec1:1MeOH:H2O2%aceticacidpH2.8DVOS=150VVRF=250V0-PCWcontinuousflow1strap+5mTorrD2OCW+5mTorrD2OCW+5mTorrN2cytc+16760770780790800m/z

Hydrogenexchange(HDX)ofDifferentChargeStates+11-16+20+19

Skimmer-OrificeVoltageDifference+17+13#HDXvs.TrapTimeytc+1750100150200DVOS050001000004080120cytc+13#HDXTrapTime(ms)

Douglasetal.MassSpec.Rev.2005,24,1.q-valuecytc+20cytc+10Vo-p为H-D交换时射频电压

Effectofvaryingq-value025050075010000501001502000.1790.2990.598q=0.898#HDXTrapTime(ms)q=AcidDenaturedCytochromec,50%MeOHChargeStateq#HDX+10750.119-0.599+150.179-0.598740.898198+190.227-0.379500.758100cytc+15Cytochromechasatotalof198exchangeableH’s.

DipoleexcitationSmallauxiliaryvoltageatafrequencyoftheionmotionisappliedbetweenapairofoppositerodsn=0=2?ff=768k

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