第8章RNA转录后的加工.pptVIP

U4snRNAisalsorequiredforRNAsplicingbutdoesnotdirectlyinteractwiththeRNA第62页，共89页，星期日，2025年，2月5日剪接过程第63页，共89页，星期日，2025年，2月5日剪接体的装配、结构重排、催化:剪接过程装配步骤一：U1识别5’剪接位点.2.U2AF（U2辅助因子，U2auxiliaryfactor）的一个亚单位（65KDa）结合到嘧啶富集区（Pytract），另一个亚单位（35KDa）结合到3‘剪接位点。U2AF的65KDa亚单位与BBP(分支点结合蛋白branchpointbindingprotein或称为剪接因子1splicingfactor1)相互作用，帮助BBP结合到分之点。3.早期复合体（Early(E)complex）形成。第64页，共89页，星期日，2025年，2月5日装配步骤二U2结合到分之点，A复合体（Acomplex）形成。2.U2和分之点之间的碱基配对（A周围），使分支点A核苷酸残基突出.这个参与与5’剪接位点的反应。第65页，共89页，星期日，2025年，2月5日RNAInteractionswithintheSpliceosomeComplexA-RNAInteractions第66页，共89页，星期日，2025年，2月5日1、在5’端加帽（cap））m7Gppp鸟甘酸转移酶场所是核内帽子0：m7GpppX单细胞生物（如酵母）帽子1：m7GpppXm多细胞生物，主要形式帽子2：m7GpppXmpYm占10-15%三种帽子的共同位置在帽子1中可被甲基化帽子1帽子2第30页，共89页，星期日，2025年，2月5日剪接前加帽，剪接后加帽加帽酶的征集（recruitment）由RNA聚合酶CTD尾巴及其磷酸化状态完成，征集后转移到RNA上需要加工位点。加帽因子的征集需要Ser5磷酸化加帽发生在RNA只转录出20-40nt时——转录起始和延伸转换时刻加帽后Ser5的去磷酸化导致加帽machinary的释放。场所是核内剪接前加帽第31页，共89页，星期日，2025年，2月5日剪接前加帽：(含有最初的5‘端三个磷酸，转录第一个通常是A或G)如呼肠病毒，牛豆病毒去掉一个mRNA5‘端磷酸，留下两个末端磷酸（RNA末端磷酸酶）5’端加上GTP(鸟苷转移酶guanylyltransferase),去掉GTP的两个磷酸，形成5‘-5‘三磷酸连接鸟嘌呤第七位N原子甲基化(甲基转移酶，甲基供体是S-腺苷甲硫氨酸SAM).第32页，共89页，星期日，2025年，2月5日剪切后加帽如疱疹病毒和口炎病毒第33页，共89页，星期日，2025年，2月5日帽子结构功能：有帽子结合蛋白（CBP）与帽子结合：(1)有助于mRNA运输越过核膜，进入胞质；(2)保护5′不被酶降解；(3)翻译时供eIF（起始因子）和核糖体识别。（4）促进5’端内含子的剪切第34页，共89页，星期日，2025年，2月5日第35页，共89页，星期日，2025年，2月5日或称为RNA末端腺苷酸转移酶，Poly(A)聚合酶大约200bp2、3’端加尾（多聚腺苷酸polyA尾巴）加尾信号AAUAAA第36页，共89页，星期日，2025年，2月5日具体机制机制控制PolyA长度CPSF:cleavagepolyadenylationspecificityfactor.

CstF:cleavagestimulationfactor.

PAP:polyApolymeraseCF:factor(s)requiredforcleavage第37页，共89页，星期日，2025年，2月5日多聚腺苷酸尾巴功能：有蛋白质（PBP）与PolyA尾结合，提高了mRNA在细胞质中的稳定性。增强翻译的效率第38页，共89页，星期日，2025年，2月5日4.修饰原核生物mRNA分子中不含有稀有碱基，但真核生物的mRNA中则含有甲基化核苷酸，除了在hnRNA的5′端帽子结构中含有2－3个甲基化核苷外；在分子内部还会有l－2个m6A存在于非编码区。在序列中，m6A总是位于胞苷之后，形成了…NCm6AN序列。m6A的生成是在hnRNA的剪接作用之前发生的。Theformationofinternal6-me