伍尔夫型苯硼酸磁珠联合荧光法检测食品中单增李斯特菌和大肠杆菌O157∶H7的研究.pdfVIP

摘要

食源性致病菌是引起食源性疾病的重要因素，严重威胁着人类健康。其中，

单增李斯特菌（Listeriamonocytogenes，L.monocytogenes）和大肠杆菌O157:H7

（EscherichiacoliO157:H7，E.coliO157:H7）是主要的食源性致病菌。L.

monocytogenes是人畜共患病原菌，感染该菌后可出现流感、腹泻、发烧等症状。

E.coliO157:H7是产志贺毒素大肠杆菌的重要血清型之一，感染该菌可诱发溶血

性尿毒综合征、出血性腹泻，严重者可以导致死亡。然而，现有方法存在着过程

繁琐、灵敏度低、检测类型单一等弊端，无法满足快速检测的需求。因此，亟需

开发新的食源性致病菌快速检测方法以确保食品安全及人类健康。具有生物可

修饰表面的磁性纳米粒子（Magneticnanoparticles，MNPs），由于其顺磁性和识

别特性，不仅可以对致病菌进行分离、富集和纯化，还可作为“三明治”类传感

器的构建基底，结合各类信号输出方式实现目标菌的定量检测。本研究基于伍尔

夫型苯硼酸（Wulff-typeboronateacids）识别的磁分离平台，联合有机硅纳米胶

囊信号放大策略构建了食品中L.monocytogenes和E.coliO157:H7的系列检测

方法，各章内容分述如下：

第一章：介绍了硼酸亲和材料与顺式二醇间的分子相互作用机理，概括了荧

光碳点（Carbondots，CDs）的合成方法及在细菌检测中应用的研究进展。

第二章：构建了基于硼酸亲和的磁分离策略，并进一步采用生物素化绿色碳

点标记的荧光法特异性检测L.monocytogenes。首先，本章通过“团队硼酸亲和”

（TeamedBoronateAffinity，TBA）策略制备了伍尔夫型苯硼酸，降低了苯硼酸

的结合pH，提高了对细菌的亲和力，并将其修饰于MNPs表面制备了磁捕获探

针（B-N/APBA@MNPs）。在最佳的磁分离体系下，验证了B-N/APBA@MNPs对

L.monocytogene的捕获效果。随后，以单克隆抗体（Monoclonalantibody，mAb）

作为第二识别分子，构建了基于生物素化CDs标记的荧光法用于L.

monocytogenes检测的“三明治”结构。研究表明该方法在PBS和生菜加标样品

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中L.monocytogenes的检测限（Limitofdetection，LOD）均为2.2×10CFU/mL，

且特异性较好。

第三章：构建了B-N/APBA@MNPs分离与富集以E.coliO157:H7为代表的

革兰氏阴性菌，联合有机硅纳米胶囊-碳点辅助释放信号放大的荧光免疫分析法，

实现对E.coliO157:H7的灵敏、快速检测。首先，验证了上一章制备的B-

N/APBA@MNPs磁捕获探针对革兰氏阴性菌的捕获能力。在最佳的磁分离体系

下，验证了B-N/APBA@MNPs对E.coliO157:H7的捕获效果。其次，为了实现

高灵敏度和低检测限，将碳点包裹在有机硅纳米胶囊中制备荧光信号放大的检

测元件，并通过抗-E.coliO157:H7单克隆抗体确保了该方法的特异性，构建了

“三明治”复合物结构。研究表明该方法在PBS和生菜加标样品中E.coliO157:H7

1

的LOD均为2.5×10CFU/mL，且特异性较好。

第四章：构建了基于B-N/APBA@MNPs联合有机硅纳米胶囊爆炸性释放碳

点的灵敏免疫分析法，实现了L.monocytogenes和E.coliO157:H7的同时、反向

测定。首先，评价了B-N/APBA@MNPs磁捕获探针在混菌体系中同时捕获L.

monocytogenes和E.coliO157:H7的能力。在最佳的磁分离体系下，验证了在真

实样本中B-N/APBA@MNPs分离L.monocytogenes和E.coliO157:H7的可行性。

其次，