植物体细胞杂交.ppt

激光诱导细胞融合技术具有显著的优点，如：1）高度的选择性，可以选择任意的两个细胞之间进行融合，易于实现特定细胞融合。2）激光作用于细胞所产生的应力小、定时和定位性强、损伤小，从而提高了融合细胞的生存能力。而且，激光参数易于控制、操作方便、融合过程利于观察，实验重复性好。3）激光操控时无菌、无毒性。激光诱导细胞融合技术也有自身的缺点，如：a.技术不够成熟，需要进一步完善。b.设备非常昂贵。c.它是一种微操作技术，对实验人员和操作技术要求高，通常需要专门培训。同时，该技术每次只能靠人工操作一对细胞，过程繁琐，工作效率极差，产量也很低。第30页，共56页，星期日，2025年，2月5日第31页，共56页，星期日，2025年，2月5日细胞电融合芯片在细胞电融合研究向微芯片技术领域发展过程中，微电极间距缩小到几十微米，而电融合中细胞排队（约100～700V/cm）与电穿孔（约1～8kV/cm）所需电场条件基本不变。根据电场强度与加载电压的关系式E=V/d（E为电场强度，V为微电极两侧施加的电压，d为微电极间距），如果电极间距d=1mm，则排队电压需要10～70V，击穿电压则高达100～800V。如果电极间距缩小到d=50μm，则排队电压需要0.5～2.5V，击穿电压只需要5～40V。因此，当通过微加工工艺使微电极间距缩小后，所需电压信号就会大大降低，使细胞电融合系统成为可用电池供电的便携式系统。由此可见，融合芯片的研究对细胞电融合微系统整体的实现有极其重要的意义，将是该研究的一个重要内容，也是该系统发展成微全分析系统（micrototalanalysissystem,μ-TAS）的基础。第32页，共56页，星期日，2025年，2月5日第33页，共56页，星期日，2025年，2月5日第34页，共56页，星期日，2025年，2月5日第35页，共56页，星期日，2025年，2月5日第36页，共56页，星期日，2025年，2月5日第37页，共56页，星期日，2025年，2月5日电融合芯片缺点①常规电融合系统中异源细胞的准确配型难以实现与生物和化学融合方法相比，电融合方法由于效率较高、操作简便、对细胞无毒害、便于观察、适于仪器应用和规范操作，成为了主要的手段。不过，常规融合系统中融合配型难以控制，目标配型的产率仍然很低。因此，细胞电融合技术的研究进入微观层次，希望通过微操作方法来实现精确的细胞操作，从而解决融合配对特异性差的缺陷，同时提高自动化程度和融合效率。目前，显微操作的应用虽可以提高配型的准确度，但自动化程度和效率都很低。②现有电融合系统中微电极数目偏少，难以提高细胞融合效率现有的电融合系统中融合电极一般只有少数几对，可以同时控制和融合的细胞有限，造成融合效率不高。③常规融合仪器中融合电压很高，有潜在安全隐患，也不利于设备微型化现有细胞电融合仪器中电极间距一般为200～1000μm，细胞电穿孔所需电压在几百伏特以上。过高的电压对实验者造成不安全因素，同时，对融合后的细胞存活率也带来不利的影响。另外，所需电压越高，细胞融合仪设备制造难度也相应提高。设备研制成本很高，体积较大，难以实现便携化，限制了该技术的广泛应用。④多核融合细胞比例过高现有细胞电融合方法中，多细胞排列成细胞串的比例很高，由此带来的一个严重问题是融合细胞中多核细胞（多个细胞融合而成）的比例也相当高。这种细胞难以存活和分化，也大大降低了实际融合效率。⑤电融合芯片技术不甚完善现有电融合芯片技术还处于相当初级的阶段，电极数量少、细胞控制困难、融合配对准确性和融合效率难以同时得到保障，与其它微流控细胞研究技术的集成度也很低。第38页，共56页，星期日，2025年，2月5日空间细胞融合技术植物细胞融合过程中由于地球重力的存在,有无液泡的原生质体密度差很大,异源细胞融合率低。20世纪80年代以来,在空间材料科学的启发下,试图利用空间微重力条件改进细胞融合技术。空间细胞融合技术是直接为生物加工服务的,例如将抗药性或胞质雄性不育等细胞质基因导入另一个体细胞,有可能形成新的核质杂种;通过诱导不同种间、科属间原生质体融合,可以打破远源杂交不亲和性,广泛组合各种基因型,形成正常重力下无法获得的新型杂种植株。第39页，共56页，星期日，2025年，2月5日生物诱导融合法——仙台病毒法仙台病毒是一类被膜病毒，属于附黏液病毒族，它是多形性颗粒，直径为50～60nm，由两层磷脂组成的外膜包裹着RNA和蛋白质复合体，外膜上有两种糖蛋白，一种是HANA蛋白质，一种是F蛋白质，前者具有神经氨酸酶和血凝活性（分子量较大），