蛋白质的化学 .pptVIP

对医药生产应用的意义避免变性 在制备有生物活性的酶、蛋白质、激素或其他制品时，要求所需成分不变性，所以应严格控制操作条件，必要时还可以加入保护剂、抑制剂以增强蛋白质的抗变性能力。利用变性 细菌蛋白、杂蛋白应变性除去。第94页，共140页，星期日，2025年，2月5日核糖核酸酶的变性与复性第95页，共140页，星期日，2025年，2月5日（3）凝固加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。第96页，共140页，星期日，2025年，2月5日二、蛋白质的分离与纯化（一）盐析与有机溶剂沉淀：1.盐析：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。低盐浓度可使大多数蛋白质溶解度增加，这种现象称为盐溶作用(saltingin)。第97页，共140页，星期日，2025年，2月5日常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。盐析沉淀蛋白质时，通常不会引起蛋白质的变性。第98页，共140页，星期日，2025年，2月5日分段盐析：半饱和硫酸铵溶液可沉淀血浆球蛋白，而饱和硫酸铵溶液可沉淀血浆清蛋白。第99页，共140页，星期日，2025年，2月5日2.有机溶剂沉淀蛋白质：凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白质。沉淀原理是：①脱水作用；②使水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。第100页，共140页，星期日，2025年，2月5日3、重金属盐沉淀蛋白质蛋白质可以与重金属离子结合成盐沉淀，沉淀的条件以pH稍大于等电点为宜。因为此时蛋白质分子有较多的负离子易与重金属离子结合成盐。重金属沉淀的蛋白质常是变性的。第101页，共140页，星期日，2025年，2月5日（二）层析：层析（chromatography)是一种利用混合物中各组分理化性质的差异，在相互接触的两相（固定相与流动相）之间的分布不同而进行分离分析的技术方法。主要的层析技术有离子交换层析，凝胶层析，吸附层析及亲和层析等。第102页，共140页，星期日，2025年，2月5日第103页，共140页，星期日，2025年，2月5日第104页，共140页，星期日，2025年，2月5日第105页，共140页，星期日，2025年，2月5日第106页，共140页，星期日，2025年，2月5日（三）根据电离性质不同的分离纯化方法 1．电泳（electrophonesis）法 在外电场的作用下，带电颗粒，例如不处于等电点状态的蛋白质分子，将各着向着与其电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。 蛋白质在电场中移动的速度和方向主要取决于蛋白质分子所带电荷的性质、数量以及蛋白质分子的大小和形状，在一定条件下，各种蛋白质的电泳迁移率不同，因而可以达到蛋白质分离的目的。 电泳法是分离和分析蛋白质的重要方法。第107页，共140页，星期日，2025年，2月5日第108页，共140页，星期日，2025年，2月5日第109页，共140页，星期日，2025年，2月5日（四）超速离心：利用物质密度的不同，经超速离心后，分布于不同的液层而分离。超速离心也可用来测定蛋白质的分子量，蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比。第110页，共140页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的分离纯化蛋白质的分离和纯化主要是利用蛋白质之间各种特性的差异，包括蛋白质分子的酸碱性质、分子的大小和形状、溶解度、吸附性质和对配体分子的特异亲合力。蛋白质的酸碱性质：蛋白质是两性电解质。在蛋白质分子中，可解离基团主要来自侧链上的功能团，此外还有少数的末端α-羧基和α-氨基。可以把蛋白质分子看作是一个多价离子，所带电荷的性质和数量是由蛋白质分子中的可解离基团的种类和数目以及溶液的pH所决定的。对某一种蛋白质来说，在某一pH时，它所带的正电荷与负电荷恰好相等，即净电荷为零，这一pH称蛋白质的等电点。蛋白质的等电点在中性盐存在下可发生明显的变化，这是由于蛋白质分子中的可解离基团可与中性盐中的阳离子或阴离子相结合。在没有其他盐类干扰时，蛋白质的质子供体基团解离出来的质子数与质子受体基团结合的质子数相等时的pH称为蛋白质的等离子点。蛋白质分子的形状：测定蛋白质分子的形状或构象，最精确的方法是X射线晶体结构分