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环境工程微生物实验指导书-图文

实验一光学显微镜的操作及细菌形态观察

1.1实验目的

(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。

(2)观察几种典型细菌的形态与构造，学会绘制微生物图。

1.2实验器材

显微镜、二甲苯、香柏油、载玻片、盖玻片、大肠杆菌、金黄色葡萄

球菌、枯草杆菌、球衣菌、假单胞菌、固氮菌标本片。

1.3显微镜的结构及其操作方法

1.3.1普通光学显微镜(LightMicrocope)1.3.1.1光学显微镜的结构

和各部件作用

观察、检验微生物通常用光学生物显微镜（见图1-1），显微镜分机

械装置和光学系

统两部分。

一机械装置

(1)镜筒：镜筒长度一般是160cm。它的上端装目镜，下端装物镜回

转板。回转板上一般有三个物镜。

(2)转换器：位于镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个孔或5个

孔。不同规格的物镜分别安装在各孔上。

(3)载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光

线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载破片。有的载物台上装有

自动推物器。

(4)调节器：镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，

用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。

二光学光学系统

（1）目镜：一般使用的显微镜具有2—3个目镜，其上刻有“5某”、

“10某”、“15某”(或“16某”)

等数字及符号，意即放大5倍、10倍、15倍(16倍)。这三种透镜的

焦距分别为50mm、25nn、16mm，线视场分别为20mm、14mm、10mm。

（2）物镜：物镜装在回转板上，可分为低倍物镜、高倍物镜和油镜

三种。相应的放大倍数是10某（5某）、40某（50某）、100某（90

某），相应的工作距离是7.63mm、0.5mm、0.198mm，物镜上常标注数值

孔径（N.A）。使用低倍镜和高倍镜时，一般做活体观察，不进行染色。

在观察原生动物时，低倍镜主要用来观察全部原生动物的种类和观察它的

活动状态，而高倍镜则可以看清楚微生物的结构特征。油镜在大多数情况

下是用来观察染色的涂片。

（3）集光器集光器在载物台的下面，用来集合反光镜反射来的光线。

集光器可以上下调整，中央装有光圈，可以调整光线的强弱。当光线过强

时，应缩小光圈或把集光器向下移动。

（4）反光镜反光镜装在显微镜的最下方，有平凹面反光镜。

1.3.1.2光学显微镜的分辨率与放大倍数

显微镜的分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。光学

显微镜的分辨

2

率受光干涉现象的限制。

分辨率（最小可分辨距离）=1/2光波波长/数值孔径（1-1）

D=λ/2n·in(α/2)（1-2）N.A.=nSin(α/2)（1-3）

式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。

N.A：数值孔径。

λ：可见光的波长（平均0.55mm）。n：物镜和被检标本间介质的折

射率。

a：镜口角（即入射角），该角度决定于物镜的直径和焦距见图（1-

2）。

例如：最大入射角为120°，其半角的正弦为in60=0.87，以空气为

介质时，N.A=1某0.87=0.87；以水为介质时，N.A.=1.33某0.87=1.15；

以香柏油为介质时，N.A.=1.52某0.87=1.31，见图（1-3）。

肉眼所能感受光波的波长从200mm（紫光）到700nm（红光）。设感

受光波的平均长度为550nm（0.55um），N.A.=1.25，则分辨率=1/2某

0.55/1.25=0.22um，而细菌大小从0.5～2um，故正好看到细菌。用紫光

光源效果更好。

显微镜的总放大倍数等于物镜与目镜放大倍数的乘积。

即：显微镜的放大倍数=接物镜放大倍数某接目镜放大倍数

观察微生物时，常用放大10倍或15倍的目镜。目镜装在镜筒上端，

在使用过程中并不经常变动，通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察，

主要是指使用不同物镜而言。例如使用10某目镜和40某物镜（高倍镜）

所得物象的放大倍数是400倍。

油镜的放大倍数是最大的（90`或100倍）。放