生物选修基因工程操作程序 (2).pptVIP

第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日真核细胞的基因结构（补充内容）编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游真核细胞：的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列非编码序列：包括非编码区和内含子有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日一、目的基因的获取1、目的基因主要是指______________________编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子2、获取目的基因的常用方法有哪些?（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增(PCR仪)（3）人工合成（DNA合成仪）目的基因是人们所需要转移或改造的基因,获取目的基因是实施基因工程的第一步。如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日(一)从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）1.基因文库第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日基因组文库与部分基因文库的关系第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日2.基因组文库的构建供体细胞中的全部DNA许多DNA片段重组DNA分子限制酶与载体连接受体细胞产生特定性状导入外源DNA扩增目的基因分离用限制酶切断成许多片段第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日3、cDNA文库的构建mRNA反转录cDNA(互补DNA）DNA聚合酶双链DNA反转录法：基因重组反转录酶mRNAcDNA重组DNA分子第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日PCR技术扩增目的基因第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________、_______________、___________(做启动子)、___________.②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物DNA聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增(二)利用PCR技术扩增目的基因第12页，共33页，星期日，2025年，2月5日⑥过程：a、DNA变性（95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（72℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链第13页，共33页，星期日，2025年，2月5日(三)直接人工合成通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成DNA合成仪根据已知的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料直接合成目的基因。仅限于合成核苷酸对较少的简单基因第14页，共33页，星期日，2025年，2月5日（3）人工合成——根据已知的氨基酸序列合成DNA蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成第15页，共33页，星期日，20