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牛病毒性腹泻病毒全基因克隆及核酸疫苗构建与效果探究

一、引言

1.1牛病毒性腹泻病毒概述

牛病毒性腹泻病毒（BovineViralDiarrheaVirus，BVDV）是引发牛病毒性腹泻-黏膜病（BovineViralDiarrhea-MucosalDisease，BVD-MD）的病原体，在全球养牛业中造成了广泛且严重的经济损失。

BVDV属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus），是一种单股正链RNA病毒。病毒粒子呈球形，直径约40-60nm，具有囊膜，囊膜表面有纤突，这一结构使其能够较为有效地抵御外界环境的影响，增强了其在自然环境中的生存能力和传播潜力。

该病毒的基因组全长约12.3kb，包含一个大的开放阅读框（OpenReadingFrame，ORF），编码一个约4000个氨基酸的多聚蛋白。此多聚蛋白在病毒感染宿主细胞后，会在细胞内的酶系统作用下，经过一系列复杂的切割和加工过程，最终形成多种具有不同功能的病毒蛋白，这些蛋白对于病毒的吸附、侵入、复制、装配和释放等生命周期的各个关键环节都发挥着不可或缺的作用。

BVDV具有较大的变异性，根据病毒的基因组差异及其在细胞培养方面的生物学特性的不同，可将其分为BVDV1和BVDV2两个型，每个基因型又可细分为多种基因亚型。这种复杂的分型情况不仅增加了对该病毒的研究难度，也给疫病的流行病学研究、诊断、疫苗研发和防控工作带来了诸多挑战。不同型和亚型的BVDV在致病性、免疫原性等方面可能存在显著差异，这意味着在实际的防控工作中，需要针对不同的病毒类型采取更为精准和有效的措施。

1.2BVDV的危害与流行现状

BVDV给牛群健康带来了多方面的严重威胁，其危害贯穿于牛的生长、繁殖及免疫等各个重要生理过程。

从临床症状来看，感染BVDV的牛群会呈现出多种典型症状。急性感染时，病牛通常突然发病，体温急剧升高至40-42℃，并可持续4-7天，部分病牛还会出现第二次体温升高的情况。同时，病牛精神极度沉郁，厌食现象明显，鼻眼部位有浆液性分泌物渗出。在发病后的2-3天内，鼻镜及口腔黏膜表面可能出现糜烂，舌面上皮坏死，导致流涎增多，呼气伴有恶臭。随着病情发展，严重的腹泻症状随之而来，初期为水泻，后期粪便中会带有黏液和血。此外，部分病牛还会因蹄叶炎及趾间皮肤糜烂坏死而出现跛行症状。慢性感染的病牛，发热症状通常不明显，但体温会有小幅度的波动。鼻镜上的糜烂较为常见，且可连成一片；眼内常含分泌物；口腔内糜烂少见，但门牙牙龈一般会发红；腹泻症状不定，且跛行现象较为突出。这些临床症状不仅严重影响病牛的日常生活和生产性能，还会导致牛只生长发育受阻，体重下降，饲料利用率降低，增加养殖成本。

BVDV对牛群繁殖性能的影响也极为显著。怀孕母牛感染BVDV后，极易发生流产、早产、产死胎或产出先天性缺陷犊牛的情况。据相关研究表明，感染BVDV的怀孕母牛流产率可高达20%-40%，产出先天性缺陷犊牛的比例也在10%-20%左右。这些先天性缺陷犊牛常见的问题包括小脑发育不全、运动失调、视力障碍等，即使存活，也往往难以正常生长发育，给养殖户带来巨大的经济损失。而且，BVDV还会导致母牛受孕率下降，发情周期紊乱，增加空怀期，进一步降低了牛群的繁殖效率。

免疫抑制是BVDV感染带来的又一严重后果。感染BVDV的牛群，免疫系统会受到不同程度的抑制，使其对其他病原体的易感性大幅增加，从而更容易感染其他传染性疾病，如牛呼吸道合胞体病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等，引发多种并发症，导致病情更加复杂和严重，治疗难度加大，病死率升高。

BVDV在全球范围内广泛分布，给世界养牛业造成了巨大的经济损失。在北美洲，美国作为养牛大国，BVDV的感染率一直居高不下。据美国农业部的相关统计数据显示，美国每年因BVDV感染导致的经济损失高达数亿美元，包括牛只死亡、生产性能下降、治疗费用以及疫苗接种等方面的支出。在欧洲，许多国家也深受BVDV的困扰，如英国、法国、德国等，其牛群的感染率在不同地区和养殖场之间虽有所差异，但总体处于较高水平，对当地养牛业的健康发展构成了严重威胁。

自1980年我国首次鉴定到牛病毒性腹泻病毒以来，该病毒在国内的传播范围逐渐扩大，感染情况日益严重。通过对多个省份牛群的血清学调查发现，我国牛群中BVDV的感染率普遍较高。在新疆、内蒙古等畜牧业发达地区，部分奶牛养殖场的BVDV抗体阳性率在2012-2014年间分别达到60%甚至70%以上，且呈逐年上升趋势。对我国西部牛场的调查结果显示，BVDV的平均感染率在40%左右，病毒基因型主要以