海洋微藻的细胞操作.pptVIP

5.4.1培养类型海洋微藻的培养类型按时间长短分为：1.长期保存培养2.短期保存培养第29页，共73页，星期日，2025年，2月5日类型长期保存培养短期保存培养定义指长时间保持一特定的海藻以备将来的使用的培养，能在长达3个月甚至1年的时间里保持藻的活力指藻体材料用于实验前的较短时间的培养实验用法一般不宜直接用于实验可以直接用于实验培养基营养琼脂培养基：如蛋白胨的Bold营养琼脂培养基,用于绿藻的长期保存培养获得正常微藻较低浓度培养基加速生长较高浓度培养基缺点（1）营养物必须是无菌的（2）某些藻在琼脂培养基上不能生长不能长期保存第30页，共73页，星期日，2025年，2月5日5.4.2生长测定1.分裂速率的计算生长规律：慢——块——慢生长指标：细胞数目适宜条件下，当生长速度达恒定时（指数生长期），细胞增加的速度与原来细胞数目之间有：第31页，共73页，星期日，2025年，2月5日表示在和时测得的细胞数。若用以2为底的对数来计算生长常数，则和这时k的意义为每天分裂的次数K（分裂次数/d）=Ke/ln2生长常数也可以用细胞加倍时间DT表示：DT=1/K=ln2/Ke第32页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.细胞计数方法1）血球计数板计数法血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.第33页，共73页，星期日，2025年，2月5日计数方法：用酒精擦洗计数板取一滴藻液滴在盖玻片一侧边缘，使它沿着盖玻片和计数板间的缝隙渗入计数室计数1ml细胞数=1个大方格（0.1ul）细胞数×10×1000第34页，共73页，星期日，2025年，2月5日2)光密度法原理：分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。方法:用分光光度计测得各浓度藻类的光度值，以细胞数为纵坐标，光度值为横坐标绘制细胞数和光度值的对应曲线。利用这一曲线，在测得样品的光度值后，可以查得样品的细胞数。优点：计数快速方便第35页，共73页，星期日，2025年，2月5日5.4.1培养方法1.分批培养2.连续培养3.同步培养第36页，共73页，星期日，2025年，2月5日1.分批培养

分批培养是指在一个密闭系统内投入有限数量的营养物质后，接入少量微藻种进行培养，使微藻生长繁殖，在特定条件下完成一个生长周期的培养方法。是最简单和普遍采用的方法。单胞藻的生长可分为：生长延缓期：细胞刚开始适应环境，所以生长并不旺盛，生长曲线基本呈平线状指数生长期：细胞适应了环境，生长旺盛，生长速度极快，细胞数量呈倍数增长，生长曲线陡然上升静止期：因培养基营养物有限，而细胞此时数量已达很多，相互间竞争，所以死亡的细胞数和新生的细胞数持平，生长曲线再次呈平线。第37页，共73页，星期日，2025年，2月5日2.连续培养指在一个限定的系统中，通过不断加入新鲜的营养液，在生长速度和稀释速度间建立一种平衡的关系，使培养液细胞浓度保持一定的培养方法。分为：（1）半连续培养：定期定量加入营养液，定期定量取出培养物。（2）全连续培养：不断加入营养液的同时营养液又不断流出。第38页，共73页，星期日，2025年，2月5日3.同步培养采取某种措施（变换光暗周期，温度和营养条件），使培养液中的藻类处于细胞周期中同一时期的培养方法。优点：每一周期均可得到细胞数目、干物质和细胞组成一致的材料同步培养的方法有诱导法和选择法两种。(一)诱导法??控制环境条件。诱导法就是采用物理、化学因子使微藻细胞生长进行到某个阶段而停下来，使先到达该阶段的微藻细胞个体能进人下一生长阶段，待全部群体细胞都到达该生长阶段后