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单克隆抗体KM113生物学活性检测体系构建及质量标准的深度剖析

一、绪论

1.1单克隆抗体概述

单克隆抗体（monoclonalantibody，mAb）是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。1975年，Kohler和Milstein成功创建淋巴细胞杂交瘤技术，制备出针对特定抗原的单克隆抗体，这一突破性成果为单抗的发展奠定了坚实基础。

抗体是具有4条多肽链的对称结构，形状类似“Y”，分子量约150kDa。其由两条相同的重链（约50kDa）和两条相同的轻链（约25kDa）组成，通过轻链羧基末端附近的二硫键连接。轻链分为κ和λ两种，重链有α、δ、γ、ε和μ五种，据此可将抗体分为不同类型，如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，各类型在免疫反应中发挥独特作用，像IgG能穿越胎盘保护胎儿，IgE主要参与过敏反应等。整个抗体分子可分为恒定区（C区）和可变区（V区）。恒定区氨基酸序列相对稳定，可变区位于“Y”两臂末端，其中高变区氨基酸序列变化丰富，决定了抗体结合抗原的特异性。

单抗作用机制主要与其结构密切相关。抗体的抗原结合域（Fab）特异性识别肿瘤相关抗原，进而调控下游信号通路。结晶区域（Fc）可识别并结合表达Fc受体的免疫细胞以及血液中的补体，介导抗体依赖的细胞毒作用（ADCC）、抗体依赖的细胞吞噬作用（ADCP）以及补体依赖的细胞毒作用（CDC）等效应功能。比如在肿瘤治疗中，靶向肿瘤细胞表面抗原的单抗，其Fab与肿瘤抗原结合，Fc可招募NK细胞等免疫细胞，通过ADCC作用杀伤肿瘤细胞。此外，Fc还能结合新生IgG转运受体（FcRn），从而延长单抗在体内的半衰期。

治疗性单抗发展历程是不断优化改进的过程。第一代鼠源单抗，虽特异性强，但应用于人体时，人的免疫系统会识别其为外来物，产生人抗鼠抗体（HAMA）反应，导致抗体被快速清除，还可能引发过敏反应，极大限制其临床应用，如1986年上市用于肾移植排斥反应治疗的鼠源化抗体OTK3。为解决此问题，第二代人鼠嵌合单抗应运而生，它将鼠源抗体的恒定区替换为人抗体的恒定区，保留鼠单抗可变区序列。1994年首个嵌合抗体阿昔单抗上市，1997年明星嵌合抗体利妥昔单抗用于非霍奇金氏淋巴瘤治疗。嵌合抗体虽部分解决了异种蛋白排斥问题，但其鼠源可变区仍可能诱发HAMA反应。随后发展的人源化单抗，只有重链和轻链可变区部分包含3个鼠源性抗体的互补决定区（CDR），其余为人源性，人源性可达90%以上。1998年首个上市的人源化单抗帕利珠单抗及同年上市的曲妥珠单抗，基本解决了鼠源性单抗免疫原性问题，但人源化过程繁复且成本高昂。目前的全人源化单抗，通过转基因技术等在体外加工形成，或利用基因工程改造的抗体基因缺失动物表达人类抗体，避免了鼠源性单抗的诸多缺点。2002年首个全人源化单抗阿达木单抗上市，此后全人源化单抗发展迅速。如今，单抗已广泛应用于肿瘤、免疫系统疾病等治疗领域，成为医药领域重要发展方向。

1.2类风湿性关节炎及其治疗

类风湿性关节炎（RheumatoidArthritis，RA）是一种常见的慢性、全身性自身免疫性疾病。全球发病率约为0.5%-1%，我国发病率约为0.32%-0.36%，且女性发病率高于男性，约为2-3:1。RA可发生于任何年龄段，发病高峰在30-50岁。

RA主要临床特点是对称性、侵蚀性多关节炎。早期症状通常隐匿，表现为关节疼痛、肿胀、僵硬，尤其在早晨或长时间休息后明显，即晨僵，可持续数小时，活动后症状可缓解。随着病情进展，可累及多个关节，常见于手、腕、足等小关节，逐渐向大关节发展，导致关节软骨和骨质破坏，最终引起关节畸形和功能丧失。除关节症状外，还可能出现关节外表现，如类风湿结节、肺间质病变、心血管疾病、血液系统异常等，严重影响患者生活质量和身体健康。

RA的发病机制复杂，涉及遗传、环境、免疫等多种因素。遗传因素在RA发病中起重要作用，研究表明，人类白细胞抗原（HLA）-DRB1基因与RA易感性密切相关。环境因素如感染、吸烟等可能触发机体免疫系统异常，导致自身免疫反应。在免疫因素方面，机体免疫系统错误识别自身关节组织为外来抗原，激活T细胞、B细胞等免疫细胞，产生大量细胞因子和自身抗体，如类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）等。这些细胞因子和抗体攻击关节滑膜、软骨和骨组织，引发炎症反应，造成关节损伤。

目前，RA治疗目标是控制炎症、缓解症状、阻止关节破坏、保护关节功能，提高患者生活质量。治疗方法主要包括药物治疗、物理治疗和手术治疗，其中药物