环介导等温扩增技术：下呼吸道感染致病菌检测的革新与展望.docxVIP

环介导等温扩增技术：下呼吸道感染致病菌检测的革新与展望

一、引言

1.1研究背景与意义

下呼吸道感染作为临床上极为常见的呼吸系统疾病，涵盖了急性气管炎、支气管炎、肺炎等病症，对全球人类健康构成了重大威胁，尤其是在儿童、老年人以及免疫低下人群中，其发病率和病死率均处于较高水平。据世界卫生组织（WHO）2018年的统计数据显示，下呼吸道感染在世界十大死亡原因中位居第四，在低收入国家更是位列十大死因之首。在我国，下呼吸道感染同样是一个严峻的公共卫生问题，例如社区获得性肺炎（CAP）的发病次数每年超过950万，严重影响着人们的生活质量和健康水平。

下呼吸道感染的病原体种类繁杂，包括细菌、病毒、支原体、衣原体等，单一病原感染和混合感染的情况都较为常见。近年来，随着肿瘤和器官移植患者数量的增多，以及免疫抑制剂在临床上的广泛应用，肺侵袭性真菌（如丝状真菌、隐球菌、肺孢子菌）、非结核分枝杆菌（NTM）感染的发病率呈上升趋势，使得临床诊断的难度进一步加大。下呼吸道感染若治疗不及时，会引发一系列严重的并发症，如肺水肿，患者会出现呼吸困难、发绀等症状，进而导致酸中毒和多器官损伤，严重时甚至会危及生命；还可能引发败血症，病菌侵入血液，严重时可导致心衰、肾衰、呼吸窘迫等；若发展为感染性休克，患者会出现皮肤苍白、血压下降、肢端湿冷等症状，若不及时治疗，将导致多脏器衰竭。

快速且准确地明确呼吸道感染的病原对于临床治疗至关重要。传统的病原微生物检测方法主要包括细菌培养、免疫学方法以及涂片染色镜检法等。细菌培养虽然是诊断下呼吸道感染的金标准，但存在诸多缺陷，如培养周期长，通常需要24-48小时才能诊断病原，若进行抗菌药物敏感性检测，还需额外24小时，这严重影响了临床治疗的及时性；阳性率低，难以检测到数量较少的病原菌；每次只能鉴定一种病原体，无法满足混合感染的检测需求；对特殊病原体如流感嗜血杆菌、肺炎支原体等的检测能力较弱。免疫学方法中的抗原检测法，如乳胶凝集试验、胶体金免疫层析法等，虽然操作方便、快速，可进行自检，特异度较好，但敏感度低于核酸检测，抗原阴性时不能排除该病原感染。抗体检测法，如酶联免疫吸附法等，所需时间较长，易受非特异性蛋白干扰出现假阳性，对于免疫缺陷宿主，还易出现假阴性。涂片染色镜检法操作简便快速，但灵敏度较低，难以发现数量较少的病原菌，需检验人员具备一定的工作经验，且难以鉴定到种，染色涂片的质量也会直接影响病原检出率。

环介导等温扩增（Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）技术是由日本学者TAKAHASHI等与其团队于2003年研发的一种恒温核酸扩增技术。该技术具有快速准确、敏感性高、特异性强、操作简单等优点，能够在简单的恒温条件下进行扩增，不需要昂贵的PCR仪器，总扩增时间大约只需要1小时，达到了快速检测试剂盒的检测标准。LAMP技术通过针对病原6个靶基因设计4种引物，并引入环引物使反应加速，再应用具有链置换活性的BstDNA聚合酶在等温条件下催化合成，最终产物由一系列反向重复靶序列构成的茎环DNA结构片段。在呼吸道感染常见细菌检测中，如肺炎链球菌检测，利用基于LAMP技术的试剂盒进行检测，敏感性高达98.1%，特异性达到99.2%，与PCR检测方法相比差异不大，同时具有操作简便、扩增时间短的优势；对鼻疽杆菌的检测率达到92%，与PCR检测法相比，具有同等甚至更优异的检测效果；在肺炎克雷伯杆菌检测中，也能获得准确快速的检测结果，具有优异的特异性和灵敏性。

鉴于传统检测技术的不足以及LAMP技术的诸多优势，本研究旨在深入探讨LAMP技术在检测下呼吸道感染致病菌中的应用，通过与传统检测方法进行对比分析，明确其在临床检测中的价值和应用前景，为下呼吸道感染的快速诊断和精准治疗提供有力的技术支持，以降低患者的病死率，提高临床治疗效果，具有重要的临床意义和社会价值。

1.2国内外研究现状

在国外，LAMP技术自问世以来，便受到了广泛关注，并在多个领域得到了应用，在呼吸道感染病原菌检测方面的研究也取得了一定成果。2011年，国外一项研究利用LAMP技术检测肺炎链球菌，结果显示其敏感性高达98.1%，特异性达到99.2%，与传统的PCR检测方法相比，差异并不显著，且LAMP技术操作更为简便，扩增时间也更短。2015年，又有研究运用LAMP技术对鼻疽杆菌进行检测，检测率达到了92%，与PCR检测法相比，展现出了同等甚至更优异的检测效果。这些研究表明，LAMP技术在呼吸道感染常见细菌检测中具有较高的准确性和可靠性。

在国内，随着对下呼吸道感染病原菌检测需求的不断增加，LAMP