转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析.pdfVIP

南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2023，54（12）：3719-3726

ISSN2095-1191；CODENNNXAAB

DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.12.026

转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析

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左梦娜，何佳宁，尹千禧，王凤梅，马利兵

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（内蒙古科技大学生命科学与技术学院，内蒙古包头014010；包头轻工职业技术学院食品药品学院，内蒙古包头014035）

摘要：【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因（LDHA）酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性，为采用转基因商业酿

酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列，并将编码序列中的同义密码

子替换为酿酒酵母偏好密码子，经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123，再将重组表达载体pAUR123-LDHA

导入商业化酿酒酵母EC1118株，采用AureobasidinA筛选转基因酿酒酵母。将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株

分别接种于含200g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5d，期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸

能力，以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性。【结果】牛LDHA基因编码序列长1170bp，共编码389

个氨基酸残基；以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子，其替换率高达58.35%。牛LDHA

在酿酒酵母中的预计半衰期20h，其二级结构富含α-螺旋和无规则卷曲。替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载

体pAUR123携带导入酿酒酵母中，经AureobasidinA筛选获得1株转基因酿酒酵母菌株，命名为EC1118-LDHA。转基

因酿酒酵母EC1118-LDHA株以200g/L葡萄糖为碳源，发酵24h后的LDHA活性达4.7±1.2mU/mg，发酵2~3d后约制

备出30g/L乳酸，同时产生约70g/L乙醇，乳酸产出率约为0.15g/g葡萄糖。【结论】将替换酿酒酵母偏好密码子后的牛

LDHA基因编码序列导入酿酒酵母中能成功构建转牛LDHA基因酿酒酵母，牛LDHA基因的导入不会影响商业化酿酒

酵母的发酵能力，且赋予了酿酒酵母以200g/L葡萄糖为碳源约制备出30g/L乳酸的能力。因此，采用转牛LDHA基

因酿酒酵母制备食品级乳酸完全可行。

关键词：酿酒酵母；牛；乳糖脱氢酶A基因（LDHA）；乳酸；发酵

中图分类号：S816.73；TQ921.3文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）12-3719-08

ConstructionofbovineLDHAgeneticallymodifiedSaccharo⁃

mycescerevisiaeandanalysisofitsabilityinproducing

lacticacid

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ZUOMeng-na，HEJia-ning，YINQian-xi，WANGFeng-mei，MALi-bing

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（SchoolofLifeScienceandTechnology，InnerMongoliaUniversityofSciencea