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肝细胞体外长期培养的干细胞研究与应用

肝细胞体外长期培养的干细胞研究与应用

一、研究背景

肝细胞是肝脏的主要细胞类型，具有维持肝功能、解毒、脂质代谢等多种生物学功能。然而，传统的肝细胞体外培养存在着细胞易过度增殖、功能急剧下降等问题，限制了肝细胞的应用。而众所周知，干细胞具有不断自我复制的能力，因此长期的肝细胞培养中利用干细胞参与其中，可以有效地解决这些问题。

二、研究目的

本研究旨在探究肝细胞在体外长期培养中，与干细胞之间的相互影响，以及干细胞在肝细胞培养过程中对其生物学功能的促进作用。通过这些探究，为肝细胞体外培养及治疗方案的优化提供理论和实验依据。

三、研究内容及方法

1.样品采集及处理

本研究选取人体及动物模型的肝细胞进行体外培养。样品初次收集后，进行细胞质体分离及液氮保存，并进行初步处理以消除细胞外来因素的影响。

2.体外培养

采用现代基因工程技术，将原代的肝细胞进行分离及纯化后，经过质粒转染等方法将干细胞引入肝细胞培养基中，从而建立一种新的肝细胞培养体系。

3.细胞及基因检测

通过对培养过程中的细胞信息的检测以及RNA的测序，采用高通量测序技术对该培养体系中的生物学功能进行分析，来探究培养条件对肝细胞功能的影响以及干细胞的作用机制。

4.动物实验检测

对体外培养出的肝细胞进行小鼠移植实验，进行血肝酶等指标的检测和肝组织的形态学分析，对移植后的肝细胞进行活性检测和病理学分析。

四、预期研究成果

1.建立了新的肝细胞体系

通过引入干细胞，建立了一种新的肝细胞培养体系，有效地解决了传统肝细胞培养过程中的难题。

2.探究了干细胞在肝细胞培养中的促进作用

本研究将探究干细胞在肝细胞体外培养中的促进作用，如其对肝细胞细胞周期及分化的影响等。

3.探究新肝细胞培养体系的生物学功能

通过对肝细胞及其外界环境的监测，将得到该新体系相较传统体系的发展优势，并为其在临床上的应用提供理论依据。

五、参考文献

1.Qiang-YongZhang,etal.Long-termcultureanddifferentiationofhumanhepatocytesmonitoredbyβ-cateninexpression.Experimentalcellresearch312.3(2006):267-277.

2.Cheng,JeanX.,etal.Long-termcultureandexpansionofprimaryhumanhepatocytes.Naturebiotechnology20.7(2002):678-683.

3.U.S.DepartmentofHealthandHumanServices.Guidanceforindustry:Preclinicalassessmentofinvestigationalcellularandgenetherapyproducts.FDA(2013).

6.Service,RobertF.Livercellscoaxedtodivide.(2008).

一、特殊的应用场合

1.器官移植前肝细胞培养：将采集的肝细胞经过体外长期培养及干细胞参与后移植到患者身体内，以修复或替代患者本身的肝细胞功能。

2.肝功能损伤修复：利用体外培养的肝细胞，通过定向分化或干细胞加入的方式，促进细胞增殖及重建患者的肝脏功能。

3.肝损伤的临时替代：由于肝脏组织具有较强的自愈能力，因此可采用体外培养出的肝细胞进行临时替代，待肝脏组织恢复后，再行移植回体内。

4.胆囊炎治疗：透过人工培育出的肝细胞代替患者自身的肝细胞完成胆囊中的代谢作用，达到治疗胆囊炎的目的。

5.肝癌治疗：将人体体外培育出的肝细胞注射入患者肝脏中，促进肝细胞增殖及重建功能，达到治疗肝癌的目的。

二、特殊场合的条款

1.器官移植前肝细胞培养

（1）甲方需提供经公证的采集证明及双方签署的知情同意书；

（2）服务结束后，甲方需提供移植后肝细胞的功能修复情况及移植后的存活率等数据；

（3）甲方需提供完善的医疗卫生服务，协助乙方完成移植手术。

2.肝功能损伤修复

（1）乙方需配合甲方提供患者肝功能损伤情况的详细资料；

（2）服务完成后，甲方需为乙方提供肝脏保养及康复指导。

3.肝损伤的临时替代

（1）乙方需提供患者详细的肝损伤程度以及预计所需助力的时间；

（2）甲方需配合乙方，提供足够的肝细胞用于临时替代。

4.胆囊炎治疗

（1）乙方需配合甲方，提供患者详细的病史及诊断报告；

（2）甲方需提供足够的肝细胞以及培育所需保养时长；

（3）服务结束后，甲方需向乙方提供肝细胞培养过程中的相关实验记录。

5.肝癌