探索细粒棘球绦虫粪抗原筛选及ELISA检测新路径.docxVIP

探索细粒棘球绦虫粪抗原筛选及ELISA检测新路径

一、引言

1.1研究背景

细粒棘球绦虫（Echinococcusgranulosus）是一种对人类和动物健康具有严重威胁的寄生虫，其引发的细粒棘球蚴病（cysticechinococcosis，CE），又称囊性包虫病，是一种全球性分布的人兽共患慢性寄生虫病。在畜牧区，该病呈现地方性流行态势，对当地的畜牧业发展和居民健康造成了极大的负面影响，被形象地称为“虫癌”。

在我国，新疆、青海、西藏、甘肃、宁夏、内蒙古和四川西部等地区是细粒棘球蚴病的高发区域。据相关统计数据显示，我国人包虫病平均患病率达0.63%，在部分感染严重地区，患病率更是高达8.93%-12.38%。与此同时，家畜的感染情况也不容乐观，牛感染率处于29.09%-60.36%的区间，羊感染率则在33.89%-53.14%之间。全国每年患包虫病的家畜数量超过5000万头，因家畜死亡和脏器废弃所导致的直接经济损失超过30亿。

细粒棘球绦虫的生活史较为复杂，犬科动物作为其终宿主，成虫寄生于犬、狼等动物的小肠内；而羊、牛、猪及人等则充当中间宿主，幼虫（棘球蚴）主要寄生在中间宿主的肝脏、肺脏等器官内。在漫长的病程中，潜伏期可长达1-30年。多数患者在早期通常无明显症状，但随着棘球蚴囊在寄生部位逐渐增大，会引发占位性压迫、刺激症状。一旦棘球蚴囊破裂，不仅会导致囊内原头蚴扩散，引发多发性种植性棘球蚴病，还可能因囊液的强抗原性和过敏原性，导致患者出现严重的过敏反应，甚至过敏性休克，危及生命。

目前，针对细粒棘球蚴病的诊断方法主要有病原学检测、免疫学检测和影像学检测等。其中，病原学检测中的“氢溴酸槟榔碱泻下法”和“剖检法”存在诸多弊端，前者危险性高、耗时耗力，且对犬科动物副作用大，敏感性仅为38%（诊断细粒棘球绦虫时），后者虽阳性预期值可达100%，但需处死犬只，仅适用于抽检和评价其他检测方法。免疫学检测中的传统ELISA方法，多使用粗抗原，存在获取繁琐、试剂盒特异性和稳定性差、易与其他寄生虫发生交叉反应等问题。影像学检测则主要用于辅助诊断，难以实现早期诊断。

因此，开发一种准确、灵敏、便捷的检测方法对于细粒棘球蚴病的防控至关重要。基于粪便样本的检测方法因具有取材方便、对动物无伤害等优点，成为研究的热点。通过筛选高特异性的细粒棘球绦虫粪抗原，并建立基于此的ELISA检测方法，有望为细粒棘球蚴病的早期诊断和流行病学调查提供有力的技术支持。

1.2细粒棘球绦虫研究现状

细粒棘球绦虫隶属带科棘球属，成虫身形小巧，体长通常在2-11mm，多在5mm以下。其结构精细，由头节、颈、幼节、成节及孕节依次组成。头节上配备四个吸盘和顶突，这些结构对于其在宿主肠道内的附着起着关键作用；体节上布满棘球状突起，这种特殊的体表结构与它的生存和繁殖策略密切相关。孕节内蕴含数量众多的虫卵，一般在100-1500个之间，虫卵呈圆形或椭圆形，内部包含六钩蚴，这是其感染阶段的重要形态特征。

在漫长的进化历程中，细粒棘球绦虫形成了独特的生活史，这一过程涉及终宿主和中间宿主的交替。犬科动物，如犬、狼、狐狸等，作为终宿主，成虫安稳地寄生于它们的小肠内。成虫在终宿主肠道内完成交配和产卵，虫卵随着终宿主的粪便排出体外，广泛散布于外界环境中，如土壤、水源、牧草等。当中间宿主，包括羊、牛、猪及人等，误食了被虫卵污染的食物或水后，虫卵在中间宿主的胃肠道内孵化，释放出六钩蚴。六钩蚴凭借其特殊的结构和生理特性，穿过肠壁，进入门静脉系统，进而随着血液循环抵达肝脏、肺脏等器官。在这些器官中，六钩蚴逐渐发育成棘球蚴，棘球蚴呈囊状，囊壁分为外层的角皮层和内层的生发层，囊内含有生发囊、原头蚴和囊液。随着棘球蚴的不断生长，会对寄生器官造成严重的损害，引发一系列的病理变化和临床症状。

细粒棘球绦虫的致病机制较为复杂，主要是由棘球蚴在组织内寄生所引发的占位性病变。棘球蚴在生长过程中，会不断压迫周围组织和器官，导致组织缺血、缺氧，进而引发器官功能障碍。以肝脏为例，当棘球蚴寄生在肝脏时，会导致肝脏肿大，患者常出现肝区疼痛、腹胀、消化不良等症状；若寄生在肺部，则会引起咳嗽、胸痛、咯血等呼吸系统症状。此外，棘球蚴囊一旦破裂，囊内的原头蚴会接触周围组织，引发多发性种植性棘球蚴病，使得病情进一步恶化。同时，囊液具有很强的抗原性和过敏原性，溢出后可导致患者产生过敏反应，严重时甚至会发生过敏性休克，危及生命。

细粒棘球蚴病呈世界性分布，在畜牧区呈现地方性流行的特点。在全球范围内，高发区涵盖欧亚部分地区，如地中海沿岸国家、俄罗斯及其周边的独立国家；非洲北部和东部地区，由于畜牧业较为发达，