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专题17基因工程
第1节重组DNA技术的基本工具(建议25分钟)
1.基因工程是指按照人们的愿望,通过等技术,赋予生物新的,创造出更符合人们需要的新的和。从技术操作层面看,由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫作技术。
2.基因工程的基本工具是、、。
①限制性核酸内切酶又称,被称为“分子手术刀”。这类酶(主要、全部)是从
生物中分离纯化出来的。它们的作用是
。大多数限制酶的识别序列由个核苷酸组成,也有少数限制酶的识别序列由核苷酸组成。DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式即末端和末端。
②被称为“分子缝合针”,其作用是。基因工程中的DNA连接酶,分为两类:一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为连接酶;另一类是从T4噬菌体中分离出来的,称为连接酶。这两类酶都是将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的,连接酶只能将只有互补黏性末端的DNA片段连接起来,不能连接具有平末端的DNA片段。而连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端的效率比较(低、高)。
③基因进人受体细胞的被称为“分子运输车”,通常是利用作为载体,它是一种
的、结构(简单、复杂)、独立于之外,并具有能力的分子。质粒DNA分子上有至限制酶切割位点,供外源DNA片段(基因)插人其中。携带外源DNA片段的质粒进人受体细胞后,在细胞中进行,或整合到上。质粒上常有特殊的基因,如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等基因,这些基因的作用是。
3.在基因工程中使用的载体除质粒外,还有、等。它们来源不同,在大小、结构、复制方式以及插人外源DNA片段大小上也有很大差别。
4.在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过
的。载体DNA必需、不必)是安全的,(会、不会)对受体细胞有害,或(进入、不进人)到除受体细胞外的其他生物细胞中去。
5.DNA连接酶与DNA聚合酶的区别是
。
6.限制酶不剪切细菌本身的DNA的原因是
。
实验:DNA的粗提取
1.实验原理:DNA、RNA领自质和腊质等在物理和化学性质方面存在差异,可以利用这些差异,
选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。例如,DNA(溶于、不溶于)酒精,但某些蛋白质(溶于、不溶于)酒精,利用这一原理,可以初步分离DMA与蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中不同,它能溶于2mo/L的NaCl溶液。在一定温度下,DNA遇
试剂会呈现蓝色,因此可以作为鉴定DNA的试剂。
2.目的要求:了解DNA的物理和化学性质,理解DNA粗提取和鉴定的原理:学会DNA相据取的方法以及用试剂对DNA进行鉴定。
3.材料:新鲜洋葱、猪肝等、体积分数为的酒精、研磨液、2mo/L的NaCl溶液、试剂和蒸馏水等。
4.方法步骤
(1)称取约30g洋葱,
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