第三节蛋白质结构.pptVIP

影响??-螺旋形成的因素⑴极大的侧链基团（存在空间位阻）；⑵连续存在的侧链带有相同电荷的氨基酸残基（同种电荷的互斥效应）；⑶有Pro存在时，（不能形成氢键），因此将中断α螺旋。⑷有Gly，因为侧链过于简单，而导致构象太“柔顺”。*第62页，共88页，星期日，2025年，2月5日羧基末端基氨基酸测定羧基末端---肼解法*第30页，共88页，星期日，2025年，2月5日羧肽酶(carboxypeptidase)是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解AA。目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y.羧基末端基氨基酸测定羧基末端---羧肽酶法*第31页，共88页，星期日，2025年，2月5日用LiBH4使C末端氨基酸还原成氨基醇，然后水解，测定氨基酸，即可知C末端氨基酸。羧基末端基氨基酸测定羧基末端---硼氢化锂还原法-------------H2N-CH-CO-NH-CH-COOHH2N-CH-CO-NH-CH-CH2OHLiBH4|

R1|

R2|

R1|

R2*第32页，共88页，星期日，2025年，2月5日（2）测定步骤B.多肽链的拆分。蛋白质一级结构的测定*第33页，共88页，星期日，2025年，2月5日(2)测定步骤B.多肽链的拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).蛋白质一级结构的测定*第34页，共88页，星期日，2025年，2月5日(2)测定步骤C.二硫键的断裂还原法:?-巯基乙醇(还原法)处理，使二硫键还原为巯基.SH-CH2-CH2-OH蛋白质一级结构的测定*第35页，共88页，星期日，2025年，2月5日(2)测定步骤氧化法:应用过甲酸氧化法拆分多肽链间的二硫键。蛋白质一级结构的测定*第36页，共88页，星期日，2025年，2月5日（2）测定步骤D.测定每条肽链的氨基酸组成根据蛋白质水解蛋白质一级结构的测定完全水解（彻底水解）不完全水解（部分水解）水解产物是aa混合物水解产物是各种大小不同的肽段和aa*第37页，共88页，星期日，2025年，2月5日水解方法反应条件产物优点缺点酸水解6MHCl或4MH2SO4共煮20hrsL-aa不引起消旋Trp被破坏；一部分羟基aa(Ser,Thr)被分解；Asn和Gln的酰胺基被水解下来碱水解5MNaOH共煮20hrsL-aa和D-aa混合物不破坏Trp引起消旋；Arg脱氨基生成鸟氨酸酶水解生理温度、pH肽段和氨基酸混合物不破坏aa不引起消旋酶解时间长Table1-2*第38页，共88页，星期日，2025年，2月5日（2）测定步骤E.多肽链断裂蛋白质一级结构的测定多肽链断裂法：酶解法和化学法*第39页，共88页，星期日，2025年，2月5日酶解法:胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶多肽链的选择性降解（2）测定步骤*第40页，共88页，星期日，2025年，2月5日Trypsin：R1=Lys和Arg侧链（专一性较强，水解速度快）。R2=Pro水解受抑。肽链水解位点胰蛋白酶-HN-CH-CO-NH-CH-CO-R1R2*第41页，共88页，星期日，2025年，2月5日或胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin）：R1=Phe,Trp,Tyr时水解快;R1=Leu，Met和His水解稍慢。R2=Pro水解受抑。肽链水解位点糜蛋白酶*第42页，共88页，星期日，2025年，2月5日Pepsin：R1和R2＝Phe,Trp,Tyr;Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度较快。R1=Pro水解受抑。肽链水解位点胃蛋白酶*第43页，共88页，星期日，2025年，2月5日thermolysin：R2=Phe,Trp,Tyr;Leu，Ile,Met以及其它疏水性强的氨基酸水解速度较快。R2=Pro或Gly水解受抑。R1或R3=Pro水解受抑。肽链水解位点嗜热菌蛋白酶*第44页，共88页，星期日，2025年，2月5日谷氨酸蛋白酶：R1=Glu、Asp(磷酸缓冲液);R1=Glu(碳酸氢铵缓冲液