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;学习目的;第一节概述;常规解决办法;惯用的固-液分离办法重要是:过滤和离心。
但是不同来源的培养液和发酵液其固-液分离速度差别很大,取决于该介质的理化性状,重要是细胞或菌体的大小和介质的黏度。
细胞絮凝技术是近年来发展很快的一种行之有效的办法。;发酵液中杂质诸多,对后续分离影响最大的是高价无机离子(Ca2+,Mg2+,Fe3+)和杂蛋白等。
在预解决时,应尽量出去这些物质。;第二节预解决的目的和办法;二、预解决办法;2.调节悬浮液的pH值
这个办法也很简便。
全细胞的聚集作用取决于pH值的大小,恰当的pH能够增进聚集作用,普通用草酸或无机酸或碱来调节。;;凝聚和絮凝都能有效增加颗粒尺寸,增大颗粒的沉降或浮选速率,提高滤饼的渗入性或在深层过滤时产生较好的颗粒保存作用。
深层过滤:颗粒尺寸比介质的孔道直径小得多,但孔道弯曲细长,颗粒进入之后很容易被截住,更由于流体流过时所引发的挤压和冲撞作用,颗粒紧附在孔道的壁面上,这种过滤是在介质内部进行的,介质表面无滤饼形成。;凝聚和絮凝;凝聚和絮凝;絮凝过程
;;凝聚剂和絮凝剂的类型;4.去除杂蛋白质的其它办法;⑵变性沉淀
蛋白质从有规则的排列变成不规则构造的过程称变性,变性蛋白质在水中的溶解度较小而产生沉淀。
办法:加热、大幅变化pH、加有机溶剂(丙酮、乙醇等)、加重金属离子(Ag+,Cu2+,Pb2+等)、加有机酸(三氯乙酸、水杨酸、苦味酸、鞣酸、过氯酸等)及表面活性剂。;⑶吸附
吸附作用常能有效除去杂蛋白质。
在发酵液中加入某些反映剂,它们互相反映生成的沉淀物对蛋白质具吸附作用而使其凝固。;5.不溶性多糖的去除;6.高价金属离子的去除;
1、概念
细胞破碎是用物理、化学、酶或机械的办法来破坏细胞壁???细胞膜的办法。
细胞破碎技术是指运用外力破坏细
胞膜和细胞壁,使细胞内容物涉及目的产物成分释放出来的技术。
2、目的
破坏细胞外围,使细胞内容物释放出来。;3.原理
⑴细胞的构造
细胞壁的破碎最核心。
动物细胞无细胞壁,易于破碎。
植物和微生物细胞的细胞壁结实,破碎困难。;①细菌
革兰氏阳性菌的细胞壁重要由肽聚糖层构成,细胞壁厚,为15-50nm。
革兰氏阴性菌的细胞壁在肽聚糖外侧尚有脂蛋白和脂多糖及磷脂构成的两层外壁层,肽聚糖层1.5-2nm,外壁层8-10nm。
因此革兰氏阳性菌的细胞壁比革兰氏阴性菌结实,较难破碎。;细胞壁的构造及构成;②真菌和酵母
细胞壁呈丝状,比革兰氏阳性菌的细胞壁厚,约60nm,更难破碎。
③霉菌
细胞壁较厚,为100-250nm。
④哺乳类细胞、嗜盐菌和支原体
哺乳类细胞和嗜盐菌缺少坚硬的细胞壁,支原体没有细胞壁,易破碎。;⑤藻类
细胞壁较复杂,其重要成分是纤维状的多糖类物质。;细胞壁的构造及构成;⑵细胞破碎和产物释放原理;破碎办法;二、细胞破碎法;细胞壁的破碎;细胞壁的破碎;1.机械破碎办法;作用机理:细胞悬浮液在高压作用下从阀座与阀之间的环隙高速(可达成450m/s)喷出后撞击到碰撞环上,细胞在受到高速撞击作用后,急剧释放到低压环境,从而在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。高压匀浆器的操作压力普通为50~70MPa。;1.机械破碎办法;影响破碎效率的因素;1.机械破碎办法;原理:在搅拌桨的高速搅拌下微球高速运动,微球和微球之间以及微球和细胞之间发生冲击和研磨,使悬浮液中的细胞受到研磨剪切和撞击而破碎。产热由夹套带走。;珠磨机主体:立式和卧式圆筒型腔体
普通,卧式比立式珠磨破碎效率高:由于
立式机中向上流动的液体在某种程度上会
使研磨珠流态化,从而减少其研磨效率。
研磨珠:玻璃(密度为2.5g/cm3)或氧化
锆(密度为6.0g/cm3)微球(粒径约0.1~10mm),填充率为80%~8
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