家蚕杆状病毒表达系统中口蹄疫病毒组合基因的表达特征与差异解析.docxVIP

家蚕杆状病毒表达系统中口蹄疫病毒组合基因的表达特征与差异解析

一、引言

1.1研究背景

口蹄疫（Foot-and-MouthDisease，FMD）是一种极具破坏力的偶蹄动物传染病，其病原体为口蹄疫病毒（Foot-and-MouthDiseaseVirus，FMDV）。这种疾病具有急性、热性以及高度接触性传染的特点，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须通报的动物传染病，在我国也被归为一类动物传染病。FMDV的宿主范围广泛，涵盖牛、羊、猪等多种重要的家畜，一旦暴发，传播速度极快，可在短时间内造成大规模感染。

FMD的危害巨大，患病幼年家畜的死亡率居高不下，而成年家畜即便死亡率相对较低（一般为3%-5%），但也会严重损害其生产性能，如种用性能、乳用性能、皮用性能、毛用性能、肉用性能和役用性能等，给畜牧业带来沉重打击。国际上，一旦某地区发生口蹄疫，发病动物及其同群动物，甚至疑似被感染动物通常都要被全部扑杀，以防止疫情扩散，这无疑会造成巨大的经济损失。而且，一个国家若出现口蹄疫疫情，其他国家往往会严格限制从该国进口畜产品，甚至关闭进出口贸易，这不仅影响畜牧业本身，还会对相关产业链及国家经济产生连锁反应。在2001年，英国爆发的口蹄疫疫情，导致超过600万头牲畜被扑杀，直接经济损失高达80亿英镑，还对其旅游业、农业等相关产业造成了深远的负面影响，引发了社会的广泛关注和不安。2010-2011年，口蹄疫在亚洲和非洲的部分地区暴发，多个国家的畜牧业遭受重创，大量牲畜死亡或被扑杀，畜产品出口受阻，给当地经济和民生带来了极大的困难。

在FMD的防控措施中，疫苗免疫接种是关键环节，对控制疫情的传播和扩散起着至关重要的作用。传统疫苗，如灭活疫苗和弱毒疫苗，在FMD的预防控制中曾占据主导地位。灭活疫苗是将毒株经病毒培养系统大量扩增后，用灭活剂（如甲醛、胺类衍生物等）处理，使其丧失感染力，但仍保留免疫原性，再添加佐剂乳化制成。1947年，Frenkel首次采用牛舌上皮培养病毒抗原，成功制成FMDV甲醛灭活疫苗，该疫苗的应用在当时有效控制了欧洲FMD的流行。然而，灭活疫苗存在诸多局限性。其热稳定性差，需要低温保存，这在冷链设施不完善的地区难以实现有效保存和运输；免疫持续期短，需要频繁接种，增加了养殖成本和工作量；抗病毒谱有限，对不同血清型的FMDV保护效果不一；而且，由于其可能诱导动物机体产生口蹄疫病毒非结构性蛋白抗体，无法区分注射疫苗动物和自然感染动物，不利于养殖场的疫病净化；同时，还存在病毒灭活不彻底而散毒的风险。

弱毒疫苗是将原始强毒株通过非易感动物（如雏鸡、家兔和豚鼠等）、鸡胚或组织培养细胞等连续传代，使其毒力减弱，再加入适当佐剂乳化制备而成。虽然弱毒疫苗能诱导动物机体产生一定的保护性免疫力，但存在严重缺陷。研究发现，对某些动物无毒力的弱毒疫苗，对另一些动物可能是强毒，获得毒力减弱且免疫原性优良的弱毒株难度极大。此外，弱毒疫苗可能导致免疫动物出现病毒血症、长期带毒并向外排毒，还存在毒力返强的问题，这使得许多国家和地区逐渐放弃使用弱毒疫苗，转而主要采用灭活疫苗进行防控，但灭活疫苗的问题依然存在。

随着分子生物学和基因工程技术的飞速发展，为解决传统疫苗的不足，新型基因工程疫苗的研制成为FMD疫苗研究的重点和热点。新型基因工程疫苗包括亚单位疫苗、重组活载体疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗和病毒样颗粒（VLPs）疫苗等。这些疫苗具有传统疫苗所不具备的优势，如安全性高、免疫原性强、可区分疫苗免疫和野毒感染动物等。家蚕杆状病毒表达系统作为一种真核表达系统，具有安全性高、对外源基因克隆容量大、重组病毒易于筛选、具有完备的翻译后加工修饰系统和高效表达外源基因的能力等特点，在新型FMD基因工程疫苗的研制中展现出巨大的潜力，利用该表达系统研制安全、高效的FMD疫苗，已成为一个新颖且行之有效的途径。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用家蚕杆状病毒表达系统，实现口蹄疫病毒组合基因的高效表达，并深入分析其在不同条件下的表达差异，为口蹄疫新型基因工程疫苗的研发提供坚实的理论基础和实验依据。

在口蹄疫的防控中，疫苗发挥着核心作用。传统疫苗在长期的应用过程中，暴露出诸多难以克服的缺点，如热稳定性差，在高温环境下疫苗的活性容易降低甚至丧失，这使得其在运输和储存过程中需要严格的冷链条件，极大地限制了其在一些冷链设施不完善地区的应用；免疫持续期短，动物需要频繁接种疫苗，不仅增加了养殖成本，还可能对动物造成不必要的应激；抗病毒谱有限，对不同血清型的口蹄疫病毒难以提供全面的保护；无法区分疫苗免疫动物和自然感染动物，不利于养殖场进行疫病净化工作；同时，还存在病毒灭活不彻底而导致散毒的风险，一旦发生，将可能引发严