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pcr产物连接t载体.docxVIP

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  • 2025-08-21 发布于山西
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pcr产物连接t载体.docx

    pcr产物连接t载体

    PCR产物连接T载体是分子克隆中常用的技术，主要利用TaqDNA聚合酶扩增产物末端会添加一个A碱基的特性，与3端含T碱基的T载体进行互补配对连接。以下是详细操作步骤及注意事项：

    一、实验材料准备

    主要试剂

    PCR扩增产物（需经琼脂糖凝胶电泳验证，确保条带单一、无杂带）

    T载体（如pMD18-T、pMD19-T等，需-20℃保存，避免反复冻融）

    T4DNA连接酶及配套缓冲液（含ATP，缓冲液需分装后-20℃保存）

    无菌去离子水或TE缓冲液

    器材

    无菌PCR管（0.2mL或1.5mL）

    移液器及无菌吸头

    冰盒

    恒温

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