第八章超敏反应及其疾病.pptVIP

RIA法原理及标准曲线7550301001101001000未标记抗原浓度（ng/ml)结合/未结合的放射活性（%）第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日免疫印迹法(Immunoblotting)是将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量。常用于检测多种病毒如HIV的抗体或抗原。第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日免疫印迹法示意图第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日第二节淋巴细胞的测定检测各群体淋巴细胞的数量与功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日(1)抗凝静脉血(2)加等量NS(4)密度梯度离心血浆分离液RBCPBMCPMN(3)混匀后，缓慢加于分离液上第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日一、淋巴细胞类型和数目的测定1、花结试验：E花结试验可用于检测T细胞数目。EA花结试验可用于检测B细胞数目。2、免疫荧光法：常采用间接免疫荧光法。3、流式细胞术：借助流式细胞仪（FCM)。第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日花结试验示意图第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日T细胞功能测定体外法：T细胞增殖试验形态学检查3H-TdR掺入法MTT法体内法：用生物抗原或化学抗原作皮内试验。OT-PPD皮试SD-SK皮试第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时细胞毒试验（51Cr释放法）示意图第39页，共58页，星期日，2025年，2月5日酶联免疫斑点法

（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISA)是在ELISA的基础上建立的检测抗体生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。第40页，共58页，星期日，2025年，2月5日CK抗体包被的反应板CK抗原包被的反应板加入淋巴细胞加入酶标记二抗加入底物检测抗原特异性B细胞加入底物T细胞产生CK的检测加入淋巴细胞加入酶标的CK抗体第41页，共58页，星期日，2025年，2月5日第1页，共58页，星期日，2025年，2月5日提要利用免疫学原理建立的免疫学检测技术主要应用于对多种免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反应和肿瘤等）的诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。第2页，共58页，星期日，2025年，2月5日第一节抗原或抗体的检测抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。第3页，共58页，星期日，2025年，2月5日抗原-抗体反应的特点?抗原-抗体的结合是特异性结合?抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合?抗原抗体反应可分为两个阶段特异性结合阶段可见的反应阶段?抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例密切相关第4页，共58页，星期日，2025年，2月5日抗原抗体比例对反应现象的影响第5页，共58页，星期日，2025年，2月5日抗原-抗体反应受多种因素影响1电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2温度：一般常使用反应在