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复合功能菌群的构建及其对铅锌胁迫下蓖麻种子萌发的影响

摘要

本研究旨在构建具有重金属抗性和促生功能的复合功能菌群，并探究其对铅锌胁迫下蓖麻种子萌发的影响。通过从铅锌污染土壤中筛选出具有耐铅锌及促生能力的菌株，经鉴定与组合构建复合功能菌群。采用不同浓度铅锌溶液模拟胁迫环境，设置添加复合功能菌群处理组与对照组，对蓖麻种子进行萌发实验。结果表明，复合功能菌群能够显著提高铅锌胁迫下蓖麻种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数，同时降低种子中铅锌的积累量，缓解重金属对种子萌发的抑制作用。本研究为利用微生物技术修复重金属污染土壤，促进植物在污染环境中的生长提供了理论依据和实践参考。

关键词

复合功能菌群；铅锌胁迫；蓖麻种子；种子萌发

一、引言

铅锌是常见的重金属污染物，随着工业活动的加剧，大量铅锌通过废水、废气和废渣排放到环境中，导致土壤铅锌污染日益严重。重金属污染不仅会破坏土壤生态系统的平衡，还会通过食物链传递，对人类健康构成潜在威胁。蓖麻作为一种适应性强、经济价值高的植物，具有一定的重金属耐受能力，在重金属污染土壤修复中具有潜在应用价值。然而，在铅锌胁迫下，蓖麻种子的萌发和幼苗生长会受到显著抑制。

微生物在土壤生态系统中扮演着重要角色，具有多种功能，如促进植物生长、降解污染物等。复合功能菌群是由多种具有特定功能的微生物组成的菌群，通过菌群成员之间的协同作用，能够发挥更强大的功能。已有研究表明，复合功能菌群可以提高植物对重金属的耐受性，促进植物在污染土壤中的生长。因此，本研究拟构建复合功能菌群，探究其对铅锌胁迫下蓖麻种子萌发的影响，为重金属污染土壤的植物修复提供新的技术手段。

二、材料与方法

（一）实验材料

土壤样品：采集自某铅锌矿周边铅锌污染土壤，将土壤样品带回实验室后，去除石块、植物残体等杂质，过2mm筛，备用。

蓖麻种子：选取饱满、无病虫害的蓖麻种子，用75%乙醇消毒30s，再用无菌水冲洗5次，晾干备用。

培养基：牛肉膏蛋白胨培养基用于细菌的分离培养；高氏一号培养基用于放线菌的分离培养；马丁氏培养基用于真菌的分离培养；改良的液体培养基用于菌株的促生能力测定和复合功能菌群的培养。

（二）菌株的筛选与鉴定

菌株分离：称取10g土壤样品加入90mL无菌水中，振荡30min，制成土壤悬液。采用稀释涂布平板法，将土壤悬液分别稀释至10?2、10?3、10??、10??、10??，取0.1mL涂布于含不同浓度铅锌（Pb2?：50、100、200mg/L；Zn2?：100、200、400mg/L）的固体培养基上，28℃培养3-5d。观察菌落形态，挑取不同形态的单菌落进行纯化培养。

菌株鉴定：对纯化后的菌株进行形态学观察，包括菌落形态、颜色、边缘、表面特征等。采用16SrDNA测序（细菌和放线菌）和ITS测序（真菌）技术对菌株进行分子生物学鉴定，将测序结果在NCBI数据库中进行比对分析，确定菌株的分类地位。

（三）复合功能菌群的构建

根据菌株的耐铅锌能力、产吲哚乙酸（IAA）能力、解磷能力和解钾能力，筛选出具有优良特性的菌株。按照一定的比例（体积比）将筛选出的菌株混合，制备成复合功能菌群菌悬液，菌悬液浓度调整为1×10?CFU/mL。

（四）铅锌胁迫下蓖麻种子萌发实验

实验设计：设置不同浓度的铅锌处理组（Pb2?：0、50、100、200mg/L；Zn2?：0、100、200、400mg/L，共16个处理组合），每个处理组合设置添加复合功能菌群处理组和对照组，每组重复3次。

实验方法：在培养皿中铺两层滤纸，分别加入不同浓度的铅锌溶液和无菌水（对照组），再将消毒后的蓖麻种子均匀放置在滤纸上，每皿20粒。添加复合功能菌群处理组每皿加入5mL复合功能菌群菌悬液，对照组加入等量无菌水。将培养皿置于25℃恒温培养箱中培养，每天补充适量的溶液，保持滤纸湿润。培养期间，每天记录种子的发芽数（以胚根突破种皮2mm为发芽标准），培养7d后，统计发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数，并测定种子中铅锌的含量。

（五）数据处理

采用Excel2016进行数据整理，使用SPSS22.0进行方差分析和显著性检验（P0.05），采用Origin2021进行图表绘制。

三、结果与分析

（一）菌株的筛选与鉴定结果

从铅锌污染土壤中分离得到28株耐铅锌菌株，其中细菌15株，放线菌8株，真菌5株。通过形态学观察和分子生物学鉴定，确定了这些菌株的分类地位。部分菌株鉴定结果见表1。

菌株编号

分类地位

耐铅锌能力（mg/L）

BJ-1

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）

Pb2?：200，Zn2?：400

FJ-2

黑曲霉（Aspergillusn