2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体课件(共28张PPT)高中生物选择性必修3(内嵌音频+视频).pptxVIP

3.2.2动物细胞工程（二）动物细胞融合与单克隆抗体

一、动物细胞融合二、单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体

三、动物细胞融合概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。原理：动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同（磷脂分子重新排布）。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。

物理方法：电融合法、离心法化学方法：聚乙二醇(PEG)高钙—高pH培养法灭活的仙台病毒诱导

灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子__________，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活：是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去______能力，但是并不破坏这些病原体的______结构。重新排布感染抗原

利用细胞融合进行基因定位已知人的体细胞和小鼠的体细胞(2N=40)杂交(融合)后，杂种细胞在有丝分裂过程中，人的染色体逐渐地丢失，最后仅保留少数几条。由于人染色体的丢失是随机的，因此不同的杂种细胞会保留不同的人染色体。结论：人胸苷激酶基因位于17号染色体上。

获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理、化学方法、灭活的病毒制备单克隆抗体物理、化学方法

4、意义：细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使____________成为可能。至今种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得了成功。目前，这一技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造_____________开辟了新途径。远缘杂交单克隆抗体

一、动物细胞融合二、单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体

1、传统抗体的缺陷长期以来，人们为了获得抗体，采用的方法是向动物体内____________________，使动物产生抗体，然后，从动物______中分离所需抗体。这种方法不仅__________，而且____________。B1B2B312细菌3反复注射某种抗原血清产量低、纯度低特异性差传统抗体是多克隆抗体四、单克隆抗体

动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞__________________。只产生一种抗体克隆B淋巴细胞与癌细胞融合形成杂交细胞四、单克隆抗体因此，要想获得大量的单一抗体，必须______单一的B淋巴细胞，形成细胞群。遗憾的是，在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，解决这一问题的思路是让____________________________________________。

选择培养基筛选单克隆抗体诱导融合注射特定蛋白免疫小鼠培养小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞（A）多种细胞多种杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞选择培养基筛选专一抗体检测注射到小鼠腹腔内增殖体外培养注射特定蛋白免疫小鼠培养小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞（A）多种细胞多种杂交瘤细胞能分泌所需抗体的杂交瘤细胞克隆化培养专一抗体检测注射到小鼠腹腔内增殖体外培养

资料：细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能无限增殖。鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径。B淋巴细胞骨髓瘤细胞（A）合成DNAD途径S途径D途径氨基喋呤A、B、AA、BB、AB1、AB2、AB3选择性培养基：在该培养基上，_______________细胞和____________________的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。未融合的亲本融合的具有同种核

AB1、AB2、AB3。。。。。。专一抗体检验阳性：有限稀释法

用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，从产生免疫反应小鼠的脾脏细胞中，他们得到了抗_________的抗体，这说明在小鼠的脾中形成了_______________细胞。他们又设法将鼠的__________细胞与脾脏细胞中产生的__________细胞融合，再用特定的__________培养基进行筛选。在该培养基上，_______________细胞和____________________的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。这种杂种细胞的特点是既能_______________，又能___________。对上述经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行____________