细菌病毒培养技术.pptVIP

4禽胚的接种后孵育接种后，蜡泪封孔，置37℃下孵化，每天照蛋2次以上，通过禽胚的病变初步确定病毒的存在及增殖情况，淘汰24h内死胚。操作要点病毒感染指征：死亡充血、出血或出现坏死灶畸形出现痘斑第30页，共49页，星期日，2025年，2月5日5病毒的收获操作要点绒毛尿囊膜接种尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日照蛋任务实例—病毒的尿囊腔接种培养技术第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日尿囊腔接种法第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日接种部位消毒任务实例—病毒的尿囊腔接种培养技术第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日尿囊腔接种任务实例—病毒的尿囊腔接种培养技术第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日①对氧气要求：专性需氧菌微需氧菌兼性厌氧菌专性厌氧菌②对CO2要求：5%CO2①水②碳源③氮源④无机盐⑤生长因子有些细菌需要（一）细菌生长繁殖的条件4、对气体要求4、PH1、营养物质2、温度3、渗透压第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日（二）细菌生长繁殖的方式二分裂法繁殖方式：链球菌八叠球菌葡萄球菌第4页，共49页，星期日，2025年，2月5日（三）细菌生长繁殖的速度第5页，共49页，星期日，2025年，2月5日（四）细菌生长繁殖的速度分为四期：迟缓期、对数期、稳定期、衰退期第6页，共49页，星期日，2025年，2月5日（五）常用培养基种类厌氧培养基基础培养基增菌培养基选择培养基鉴别培养基第7页，共49页，星期日，2025年，2月5日细菌培养技术1细菌的培养基本知识2细菌的规模化培养3细菌的计数技术第8页，共49页，星期日，2025年，2月5日二、细菌的规模化培养种子接种是指菌体增殖培养物。收获时间最佳培养时间依据细菌的生长曲线而定。对数生长期第9页，共49页，星期日，2025年，2月5日培养方法1．固体培养基表面培养法用于制备抗原、灭活苗、冻干苗。2．液体静置培养法需氧菌（深度1/2）和兼性厌氧均可用，厌氧菌（深度3/4），还需加肝块。3．深层通气培养法是目前菌苗生产的主要培养法。安装有自动控温、消泡、调pH、自动控制通气量、自动磁力搅拌等装置。细菌接种1～2h，再通入滤过除菌空气，并适当搅拌分散通入的气体，以增加培养液中的溶氧量。及时补充营养。第10页，共49页，星期日，2025年，2月5日4．透析培养法在细菌培养液与培养基之间隔有一层透析膜，使培养基中高浓度小分子量的营养成分通过透析膜（不能透过大分子的细菌或毒素）不断扩散到细菌培养液中，供细菌生长繁殖，获得高浓度的细菌或毒素。透析器1.螺栓2.培养基贮存室3.视镜4.透析膜5.培养室第11页，共49页，星期日，2025年，2月5日5、连续培养连续培养系统是一个恒定体积的流动系统，新鲜培养基以恒定的速度流入，又以相同的速率流出除去多余的液体，细菌始终保持在对数生长期。第12页，共49页，星期日，2025年，2月5日细菌培养技术1细菌的培养基本知识2细菌的规模化培养3细菌的计数技术第13页，共49页，星期日，2025年，2月5日三细菌的计数技术细菌性疫苗在制造中，往往需要计算每毫升所含细菌的总数。1.显微镜直接计数法2.活菌计数法倾注平板培养法将被测样品根据菌数含量多少，用普通肉汤或生理盐水作10倍递进稀释。分别取其1ml加在灭菌的平皿中，然后取预先加热融化且冷至45～50℃，立即摇匀放平，凝固后培养，统计平皿上长出的菌落数，乘以稀释倍数，即为每毫升样品中含有的活菌数。第14页，共49页，星期日，2025年，2月5日平板表面散布法接种量为0.1ml琼脂板的制备稀释菌液接种培养计数选择菌落数在30～300之间的平皿用以计数，每个稀释度应取其菌落平均数。活菌数／ml=2个平板平均菌落数×10×稀释倍数。举例：在10稀释的平板中所得平均菌落数为78个。计算