组织培养与植物转基因.pptVIP

4.8激光微束穿孔法原理：利用直径很小（纳米级）、能量很高的激光微束可引起细胞膜可逆性穿孔的原理，在荧光显微镜下用激光处理细胞，处于细胞周围的重组DNA随之进入细胞。此方法最适用于活细胞中线粒体和叶绿体等细胞器的基因转移。*第30页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日植株再生是基因转移的关键步骤，直接决定能否获得转基因植株。两种形式：一种是愈伤组织再生另一种是直接再生，从外植体直接诱导出芽而不经过愈伤组织的分化。转墓因植株再生的方式与一般植株再生的方式相同，主要区别是转基因植株的再生受外源基因、载体系统、抗生素、转化过程的影响。5转基因植株的再生及其检测方法5.1转基因植株再生*第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程是80年代开始兴起和发展起来的一门新技术，它是在分子遗传学的理论基础上，综合采用了分子生物学、微生物学和植物组织培养的现代方法和技术建立起来的。转移的目的基因可从动物、人、植物或微生物中获取。植物基因工程首先是随原核生物的基因工程的发展而得以发展。大肠杆菌，酵母，动植物细胞。*第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程发展迅速。自从1983年首例转基因植物（烟草）诞生以来，现在已有100多种植物通过基因工程技术获得了转基因植株，包括番茄、辣椒、茄子、马铃薯、胡萝卜、芹菜、莴苣、甜瓜、黄瓜、白菜、甘蓝、花椰菜、芥菜、石刁柏、洋葱、柑橘、柿、杨树、桉树等。*第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日2植物基因工程的载体Ti—载体其它载体RNAi*第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日根癌农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）的Ti质粒（Tumor-inducingplasmid）的改建与利用，从而开创了植物基因工程的新纪元。根癌农杆菌*第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第6页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第7页，共45页，星期日，2025年，2月5日*第8页，共45页，星期日，2025年，2月5日T－DNA*第9页，共45页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程中，我们把接受外源(目的)基因的生命体系称为“受体”。受体包括：叶圆片(盘)、胚性愈伤、胚状体、愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等不同的形态。其基本形态还是细胞。叶圆片与农杆菌共培养是最简单的转化方法；愈伤组织的转化效率高、生长速度快，是快速检测外源基因表达的最好受体；原生质体则是单克隆转化的最佳材料。3植物基因转化的受体*第10页，共45页，星期日，2025年，2月5日转化植株（未）受精卵细胞花粉胚胚轴子叶叶片茎段萌发种子子房原生质体悬浮培养细胞花器官根创伤植株块茎茎尖植物基因转化的外植体*第11页，共45页，星期日，2025年，2月5日被转化的受体细胞是单个独立的细胞，为选择遗传均一性的转基因植株提供了可能性。以悬浮细胞作受体的转化方法包括：农杆菌介导法、基因枪法、PEG介导法、电激法和显微注射法等。3.1悬浮细胞*第12页，共45页，星期日，2025年，2月5日原生质体是无细胞壁的细胞。与悬浮细胞一样，被转化的受体细胞是单个独立的细胞，为选择遗传均一性的转基因植株提供了可能性。3.2原生质体*第13页，共45页，星期日，2025年，2月5日愈伤组织容易大量制备愈伤组织的转化已在玉米、甘蔗、芹菜等植物上获得成功。用农杆菌介导法最适合。3.3胚性愈伤组织*第14页，共45页，星期日，2025年，2月5日胚状体是由愈伤组织经过改造后分化而来的，其转化方法与愈伤组织相同。3.4胚状体*第15页，共45页，星期日，2025年，2月5日叶圆片是农杆菌转化的主要受体。也称为叶盘法。用打孔器或解剖刀切取直径3—5mm的叶圆片；在液体培养瓶中与农杆菌共培养20-30min；将叶圆片在滤纸上吸干；转移到非选择性培养基上培养3d；再移入含抗生素的选择培养基上培养；诱导植株再生；获得转基因植株。叶盘法常见于双子叶植物的遗传转化。3.5叶圆片*第16页，共45页，星期日，2025年，2月5日如子叶、胚轴、茎段、根、体细胞胚、花粉等3.6其他受体*第17页，共45页，星期日，2025年，2月5日农杆菌介导法(Agrobacterium-mediatedtransformation)基因枪转化法(Microproj