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人血管内皮细胞钙粘素融合蛋白：组织工程血管化的创新驱动力

一、引言

1.1研究背景与意义

在过去的几十年里，组织工程及再生医学取得了长足的进步与发展，已经有多种自体组织替代物如皮肤、骨、软骨等成功试用于临床研究。然而，研究发现，由于细胞通过弥散获取营养和氧气的距离范围在150-200um以内条件限制，一些体积大、功能复杂的工程化组织如心肌、骨骼肌、肝脏等，在体外培养时很难超过1mm3，即使到体内也会由于宿主血管不能及时长入而导致中心部位细胞坏死。所以支架材料的快速而又充分的血管化是组织工程发展和临床应用面临的主要挑战之一。

血管组织工程作为组织工程领域的重要分支，旨在通过工程学和生物学的原理和方法，构建具有生物活性和功能的血管替代物，以满足临床治疗血管疾病的需求。其核心目的是修复或替换因疾病、损伤或老化而受损的血管组织，恢复正常的血液流通和组织功能。目前，血管组织工程的临床应用前景广阔，有望用于治疗动脉粥样硬化、血管损伤、血管狭窄等多种血管相关疾病。

在血管组织工程中，面临着诸多挑战。从材料角度来看，支架材料的生物相容性与生物降解性能直接关系到支架的长期安全性和有效性。天然聚合物如胶原蛋白、透明质酸，虽有良好生物相容性，但机械性能欠佳；合成聚合物像聚羟基丁酸酯，机械性能强，却易引发免疫反应。如何平衡材料的各项性能，开发出理想的支架材料是一大难题。细胞方面，细胞来源的选择至关重要，自体细胞存在来源有限的问题，异体细胞则可能引发免疫排斥反应。此外，细胞在支架上的接种率和存活率，以及细胞功能与血管重建的效果评估，都需要进一步优化和研究。从整体的血管构建与移植技术而言，血管构建技术的标准化与自动化程度有待提高，血管移植后的功能恢复评估以及长期疗效与安全性研究，也是当前研究的重点和难点。

人血管内皮细胞钙粘素融合蛋白在组织工程血管化中具有关键作用和潜在价值。血管内皮钙粘素蛋白是钙粘素超家族中一种典型的亚型，是一种钙离子依赖性细胞与细胞间粘附糖蛋白，由细胞外五个钙粘素重复单位、跨膜段和胞内高度保守的胞质尾区三部分组成。近年来研究发现，膜蛋白VE-cadherin介导的细胞细胞信号通路在血管新生过程中是动态变化的，其介导的这种动态的细胞与细胞之间连接作用分别为“抑制”或“激活”，即当连接激活时，翻转的VE-cadherin较多，此时细胞表现为高运动性，而当在膜上处于动态活动的VE-cadherin减少时，表现为连接抑制并且细胞逐渐表现为静止态。此外，膜蛋白VE-cadherin介导的这种“激活”连接在血管新生过程中起着特殊的作用，包括骨架重排，细胞极性建立，下游通路激活如FAK、Bcl-2等。

将人血管内皮细胞钙粘素与免疫球蛋白的Fc段融合形成的融合蛋白，具备诸多优势。Fc段与目的功能片段融合可促进功能蛋白域二聚体的形成，显著延长其半衰期，提高融合蛋白的活性和稳定性，上述特性为组织工程生物材料支架表面修饰的应用提供了绝佳的优势。通过基因重组技术制备人内皮细胞钙粘素与Fc的融合蛋白，并用于生物材料表面改性，不仅能够极大的改善生物材料的生物相容性，同时提高内皮细胞生长性能和血管化功能调控等，在组织工程及再生医学领域具有非常重要的应用价值。

1.2国内外研究现状

在国外，人血管内皮细胞钙粘素融合蛋白用于组织工程血管化的研究开展较早，取得了一系列具有开创性的成果。早期研究主要集中在融合蛋白的制备与基础特性探索。美国的科研团队率先通过基因重组技术成功制备人血管内皮细胞钙粘素与Fc段的融合蛋白，深入研究其在促进内皮细胞粘附方面的作用，发现融合蛋白能够显著增强内皮细胞在材料表面的粘附能力，为后续研究奠定了基础。

随着研究的深入，国外学者在融合蛋白对细胞行为的调控机制方面取得重要进展。研究表明，融合蛋白通过与内皮细胞表面的特定受体结合，激活细胞内的信号通路，促进细胞的增殖、迁移和分化，进而加速血管化进程。在支架材料改性方面，国外科研人员将融合蛋白修饰到多种支架材料表面，如聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）、聚己内酯（PCL）等，发现改性后的支架能够有效促进血管内皮样细胞的分化，提高支架的血管化效率。部分研究已进入动物实验阶段，将融合蛋白修饰的支架植入动物体内，观察到新生血管的形成明显增加，组织的血液供应得到显著改善。

在国内，相关研究也在积极开展，并取得了不少成果。国内科研团队在融合蛋白的制备工艺上进行创新，优化基因重组和蛋白表达、纯化流程，提高融合蛋白的产量和纯度，降低生产成本，为其大规模应用提供可能。在应用研究方面，国内学者将融合蛋白与多种天然生物材料相结合，如胶原蛋白、透明质酸等，利用天然材料良好的生物相容性和融合蛋白的促血管化特性，构建复合支架材料。实验结果表明，