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靶向GRB2基因调控猪乳腺上皮细胞生物功能机制研究

目录

靶向GRB2基因调控猪乳腺上皮细胞生物功能机制研究（1）．．．．．．．．4

文档简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.1乳腺发育泌乳生物学概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.1.2细胞信号转导通路基础．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.1.3GRB2基因功能研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

1.2GRB2蛋白的结构与功能特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

1.3猪乳腺上皮细胞研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

1.4本研究的目标与拟解决的关键问题．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

1.5技术路线与可行性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.1动物来源与乳腺组织获取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.2猪乳腺上皮细胞的分离、培养与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

2.2.1细胞分离纯化方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

2.2.2细胞系培养条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

2.2.3细胞鉴定技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.3GRB2基因表达调控技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.3.1过表达载体构建与转染．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.3.2shRNA干扰载体制备与转染．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

2.4细胞生物学功能检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

2.4.1细胞增殖活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

2.4.2细胞凋亡状态观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

2.4.3细胞迁移行为测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

2.4.4甲状腺激素受体表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

2.5分子生物学实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

2.6数据统计与分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．64

3.1猪乳腺上皮细胞分离培养模型的建立与验证．．．．．．．．．．．．．．．．67

3.2不同干预方式对猪GRB2表达的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71

3.3GRB2基因干预对猪乳腺上皮细胞增殖的影响．．．．．．．．．．．．．．．．75

3.4GRB2基因干预对猪乳腺上皮细胞凋亡的影响．．．．．．．．．．．．．．．．75

3.5GRB2基因干预对猪乳腺上皮细胞迁移能力的影响．．．．．．．．．．．．78

3.6GRB2与猪乳腺上皮细胞功能相关基因表达的关联分析．．．．．．．．79

3.7主要研究结果的讨论与比较分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

靶向GRB2基因调控猪乳腺上皮细胞生物功能机制研究（2）．．．．．．．82

研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．82

1.1乳腺发育与泌乳生理概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．84

1.2GRB2基因功能研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．85

1.3猪乳腺上皮细胞生物功能研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．90

1.4本研究的意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．