免疫检测中的干扰因素及排除方法.pptVIP

临床免疫检测中的干扰因素及对策目录一、概述二、内源性干扰因素及对策三、外源性干扰因素及对策四、总结伴随着免疫检验技术的飞速发展，免疫学检验发展已取得了从定性到定量；从常量分析到微量、超微量分析；从手工检测到全自动化检测；从单标本检测到高通量检测等重大的进步。应用范围遍及医学和其他生物学检验的各个领域。经典的免疫检验技术（如凝集试验、沉淀反应等）由于仅能定性或简单定量，灵敏度低，耗时费力，不能自动化。逐渐被高敏感度和高特异性的现代免疫学检验方法（如RIA、ELISA、荧光免疫测定、免疫化学发光测定等）所取代，而这些又主要是源于抗原抗体特异性结合及各种不同标记物的使用，加上免疫检测系统也实现自动化、集成化和微型化，也将有助于实验操作的规范化和标准化，提高检验结果的准确性和重复性。一、概述免疫学检验结果的准确性、可靠性、及时性和有效性对临床疾病的诊断、监测和疗效评估具有重要作用，在目前临床免疫检测工作中精密度是通过室内质控监控，准确性是通过室间质评进行比较验证。在实际工作中存在由干扰物质引起的误差，这种干扰还不容易被检测到。这就需要我们实际操作的工作人员不断加强学习，对试验每一个环节的影响因素都能掌控。本次主要针对免疫检测标本中，有可能会含有干扰免疫测定导致假阳性和假阴性结果的干扰物质。一、概述一、概述干扰物质是临床实验室检测过程中误差的一个重要来源，在一定程度上对检测结果会产生严重影响。从来源上可以分为内源性和外源性干扰。20世纪50年代末期，美国科学家Yalow和Berson建立了放射免疫技术用于检测糖尿病患者血浆中的胰岛素水平，开辟了临床免疫检验，并于1977年获得了诺贝尔生理奖与医学奖。后来发现接受牛或猪源性胰岛素治疗的糖尿病患者，其体内的抗胰岛素抗体能干扰血浆胰岛素的定量检测，内源性抗体干扰被发现。内源性干扰因素类风湿因子（RF)异嗜性抗体钩状效应人抗动物（如鼠、兔、羊等）抗体自身抗体补体溶菌酶抗试剂成分抗体被动获得的外源抗体或抗原交叉反应生物素外源性干扰因素溶血脂血标本被细菌污染纤维蛋白标本保存时间过长标本凝固不全样本离心时间一、概述二、内源性干扰因素及对策——类风湿因子类风湿因子（RF）：在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有较高或不同浓度的RF,一般为IgM型，亦有IgG型和IgA型，RF具有与变性IgG产生非特异性结合的特点，可与ELISA法中固相上包被的特异性抗体IgG以及随后加入的酶标特异性抗体IgG结合，从而出现假阳性结果。尤其是在捕获法IgM型特异性抗体的测定中表现最为明显，因为此时固相包被的抗体为抗人μ链抗体，IgG型RF的存在可使其大量结合于固相。类风湿因子干扰排除对策1）稀释标本：在判断急性病原体感染的特异性IgM抗体检验尤为有用。例：HAVIgM，抗HBcIgM,TORCH的IgM抗体等的检验。2）改变酶标抗体，将待酶标的抗体的Fc片段酶切除，用F（ab）替代完整IgG。3）标本中RF用变性IgG预先封闭：将热变性IgG加入到标本稀释液中，或将热变性IgG连接固相，然后加入血清标本，反应后，在吸出标本进行检测。4）测定抗原时，可在标本中加入2-巯基乙醇等，使RF降解。5）包被或酶标二抗使用特异性的及抗体IgY，RF不与之反应。二、内源性干扰因素及对策——异嗜性抗体异嗜性抗体：人类血清中含有抗啮齿类动物（如鼠、马、羊等）的免疫球蛋白的抗体，即天然的异嗜性抗体。可分为两类：一类（85％的假阳性或假性增高由其引）可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域，但不与兔IgG的Fab区结合。另一类（15％的假阳性或假性增高由其引起）可结合小鼠、马、牛和兔IgG的Fc区表位，但不与山羊和大鼠IgG的Fc区表位结合。异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗而出现假阳性或假增高，其也可造成假阴性或假性降低的结果。异嗜性抗体干扰排除对策1）使用特异性兔F（ab）片段作为固相或测定酶标抗体。2）在标本或标本稀释液中加过量的动物Ig，封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。3）使用靶特异的非Ig亲和蛋白替代固相或酶标抗体之一。采用噬菌体展示技术展示来自SPA联合文库的人IgA结合亲和蛋白，用于IgA测定，不受影响。4）使用特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。2000年左右，多名年轻女性因为血清β-hCG持续升高，被诊断为“滋养层细胞肿瘤”或“隐性滋养层细胞肿瘤”而接受了活检、子宫切除、化疗或放疗。但研究表明是由患者体内的以异嗜性抗体干扰所致。二、内源性干扰因素及对策——异嗜性抗体二、内源性干扰因素及对策——钩状效应钩