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实验影响酶促反应的因素第1页,共10页,星期日,2025年,2月5日
实验原理酶促反应在低温时,反应速度较慢甚至停止。随着温度升高,反应速度逐渐加快。当达到最适温度时,酶促反应速度达最大值。人体内大多数酶的最适温度在37℃左右。如温度过高,反应速度反而下降,甚至停止。这主要由于酶蛋白因高温变性失活之故。酶活性与溶液pH有关,pH既影响酶蛋白本身构象,也影响底物解离程度,从而改变酶与底物结合和催化作用。故每种酶都有其最适pH的作用环境。过酸过碱均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适pH为6.8。氯离子对该酶活性有激动作用,铜离子则有抑制作用。第2页,共10页,星期日,2025年,2月5日
本实验利用碘与淀粉及其水解产物(大分子糊精、麦芽糖)的颜色反应,来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的速度,从而判断温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性的影响。淀粉………………→糊精……………→麦芽糖与碘呈蓝色与碘呈紫色至红色与碘不呈色第3页,共10页,星期日,2025年,2月5日
试剂1.1%淀粉溶液2.新鲜配制的稀释唾液3.不同pH缓冲液(1)pH6.8缓冲液(2)pH5.0缓冲液(3)pH8.0缓冲液4.0.9%NaCI溶液(即生理盐水)5.1%CuSO4溶液6.碘液第4页,共10页,星期日,2025年,2月5日
操作1.温度对酶活性的影响(1)取试管三支,编号,按下表加入试剂(2)混匀后,三支试管分别置于冰浴、沸水浴、恒温水浴(37℃)中预温5分钟。再向各管加入稀唾液5滴,继续在原水浴中放置10分钟。(3)取出各管,各滴加碘液1滴(切忌摇动),观察颜色并记录。管号试剂(滴)123pH6.8缓冲液1515151%淀粉溶液555第5页,共10页,星期日,2025年,2月5日
2.pH对酶活性的影响(1)取试管三支,编号,按下表加入试剂(2)将各管摇匀,同时置37℃水浴中恒温10分钟(3)取出各管,各滴加碘液1滴(切忌摇动),观察颜色并记录。管号试剂(滴)123pH5.0缓冲液15pH6.8缓冲液15pH8.0缓冲液151%淀粉溶液555稀唾液555第6页,共10页,星期日,2025年,2月5日
3.激动剂、抑制剂对酶活性的影响(1)取试管三支,编号,按下表加入试剂(2)将各管摇匀,同时置37℃水浴中恒温10分钟(3)取出各管,各滴加碘液l滴(切忌摇动),观察颜色并记录。管号试剂(滴)123蒸馏水100.9%NaCl溶液101%CuSO4溶液10pH6.8缓冲液1515151%淀粉溶液555稀唾液555第7页,共10页,星期日,2025年,2月5日
实验报告1.结合本次实验,说说影响酶作用的几个因素2.根据实验结果,正确填写下列各表,并作简单分析(1)温度影响试管号实验条件加碘液后颜色结果分析1冰浴2沸水浴3恒温水浴第8页,共10页,星期日,2025年,2月5日
(2)pH影响(3)激动剂与抑制剂影响试管号实验条件加碘液后颜色结果分析1pH5.02pH6.83pH8.0试管号实验条件加碘液后颜色结果分析1蒸馏水20.9%NaCL溶液3l%CuS04溶液第9页,共10页,星期日,2025年,2月5日
思考題加入碘液观察结果以前,切忌摇动。你不妨试试在观察后把不起蓝色反应的试管摇动几下,或再滴加碘液,很可能会变为蓝色。这是什么缘故?第10页,共10页,星期日,2025年,2月5日
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