T ／NAIA 0402—2025 牛乳头瘤病诊断技术规程.pdfVIP

ICS65.020

CCSA031

T/NAIA

团体标准

T/NAIA0402-2025

牛乳头瘤病诊断技术规

Technicalprotocolforthediagnosisofbovine

papillomatosis

2025-08-28发布2025-09-01实施

宁夏化学分析测试协会发布

发布

T/NAIA0402-2025

牛乳头瘤病诊断技术规

1范围

本文件规定了牛乳头瘤病诊断技术的术语和定义、牛乳头瘤病临床诊断、样品采集及保存、分子生物

学诊断、病理组织学观察。

本文件适用于牛养殖户、规模化牛场对牛乳头瘤病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

T/WHAS030-2022常规病理标本HE制片染色规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

牛乳头状瘤BovinePapillomas

由牛乳头瘤病毒（BovinePapillomavirus,BPV）引起的一种常见疾病，主要影响牛的皮肤和黏膜，导

致良性肿瘤的形成。

4诊断

4.1临床症状

牛乳头状瘤主要集中在患病牛的头部，另外颈部、胸腹部等皮肤部均有乳头状瘤发生，颜色多呈灰白

色或褐色。瘤体表面粗糙呈菜花状、结节状外观，质地较为坚硬，容易破溃出血，切开瘤体后有乌黑色污

浊液体从瘤体中央流出。通常几个瘤在一起生长，有时连成一片，瘤体直径约0.5cm～8cm。

4.2样品采集及保存

采集牛血液或采用75%医用酒精对瘤体及外周进行消毒，然后采用外科手术摘除感染牛皮肤表面瘤体，

采集的乳头状瘤样本放在50%甘油生理盐水溶液中，低温保存运输送至实验室保存。

4.3病理组织学观察

1

T/NAIA0402-2025

若病理组织切片中出现以下现象则可确诊为乳头状瘤：角质层增厚，局部可见角化不全；表皮层棘层

肥厚，皮突延长，表皮上部多见上皮细胞胞质空泡化，局部可见上皮细胞点状坏死，核碎裂或溶解；真皮

层可见少量淋巴细胞与中性粒细胞浸润，局部可见毛细血管扩张。

5分子生物学诊断

5.1引物合成

基于NCBI上公布的乳头状瘤病毒L1基因序列，由生物公司合成引物P1:

P1：5-ATGGCGTTGTGGCAACAAG-3，P2：5-TTAAGCTTTGATTTTTTTTC-3，产物长度1494bp。

5.2DNA的提取方法

将样品置于超净工作台中室温解冻，取200mg的动物组织加入约3倍体积的生理盐水进行匀浆，充

分匀浆后10000r/min离心2min去除残余组织。取300μl上清液至新的洁净离心管中。然后参照“血液/细

胞/组织DNA提取试剂盒”说明书操作提取乳头样肿瘤组织基因组DNA,于-20℃保存备用。

5.3PCR扩增

采用合成引物对DNA组进行扩增，反应体系为50μL体系：DNA模板2μL，上下游引物各1μL（20

μmol/L），2×TaqMaste