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生物安全柜标准操作程序

1.目的

?规范生物安全柜的安全和有效使用。保护操作人员免受操作过程中产生的气溶胶和飞溅物的危害。保护实验样本免受污染。保护实验室环境免受操作过程中产生的气溶胶污染。确保生物安全柜的性能符合设计要求。

2.责任

2.1操作人员：严格遵守本SOP，正确使用BSC，进行日常维护和清洁消毒，报告任何异常或故障。

2.2实验室主管/负责人：确保所有操作人员接受培训并理解本SOP，监督SOP的执行，安排BSC的定期认证和维护。

2.3生物安全员（BSO）：提供生物安全指导，审核和更新SOP，参与事故调查。

2.4设施维护部门/认证承包商：负责BSC的定期认证（通常每年一次）、维修和高效过滤器更换。

3.定义

3.1生物安全柜（BSC）：一种通过高效空气过滤器（HEPA）净化空气，并提供人员、产品和环境保护的通风防护设备。

3.2工作区：BSC内部进行实验操作的台面区域。

3.3前格栅/进风格栅：位于工作区前缘，空气由此被吸入BSC。

3.4后格栅/排风格栅：位于工作区后部，空气经此排出（部分循环或外排）。

3.5高效空气过滤器（HEPA）：能去除99.97%以上0.3微米粒径颗粒的空气过滤器。

3.6气溶胶：悬浮在空气中的固体或液体微粒。

3.7污染区：工作区内部及所有放入BSC内的物品表面。

3.8清洁区：工作区外部环境。

4.安全注意事项与警示

4.1仅限受过培训人员使用：未经充分培训者严禁操作BSC。

4.2禁止明火：BSC内循环气流可能使酒精灯火焰不稳定，并损坏HEPA过滤器。强烈建议使用无菌电加热器或一次性无菌接种环/针。

4.3避免快速移动：手臂和物品的快速移动会干扰气流，破坏防护屏障。

4.4勿阻挡格栅：前格栅和后格栅必须保持畅通无阻。

4.5禁止超载：过度放置物品会阻碍气流并增加交叉污染风险。

4.6正确消毒：每次使用前后必须对工作表面和所有移出物品进行彻底消毒。

4.7个人防护装备（PPE）：操作时必须穿戴合适的PPE（实验服/防护服、手套、必要时护目镜/面罩）。手套应套住袖口。

4.8报告故障：任何异常噪音、气流变化、报警或性能问题必须立即停止使用并报告。

5.操作程序

5.1使用前准备

1.个人准备：穿上干净的实验服/防护服。洗手并戴上合适的手套（如乳胶、丁腈手套）。确保手套无破损。必要时佩戴护目镜或面罩。

2.环境准备：清理BSC周围区域，移除非必要物品，确保操作空间宽敞。关闭实验室门窗（如适用），减少房间内人员走动和空气扰动。打开实验室排风和空调系统（如适用）。

3.BSC准备：检查BSC认证标签是否在有效期内（通常为一年）。检查压力表或气流指示器（如有）是否在正常范围。检查前窗高度是否处于标定位置（通常标记线处，约200mm）。严禁在超过标定高度下操作！开启BSC风机和照明灯。让风机至少运行5分钟（预热/净化），以稳定气流并清除工作区内的颗粒物。（关键步骤）

4.紫外线灯：启动时：在风机运行前开启紫外灯进行工作区表面消毒（通常30分钟）。紫外灯开启时，人员必须离开房间或确保防护到位。

5.操作前：操作前必须关闭紫外灯！使用合适的消毒剂（如70%乙醇、含氯消毒剂，根据实验性质和兼容性选择）彻底擦拭BSC内部所有表面（工作台面、两侧壁、后壁、前窗内侧），遵循接触时间要求。从清洁区向污染区方向擦拭（即从后向前，从里向外）。

6.（关键步骤）将本次实验必需的物品有序放入BSC内：

6.1尽量精简：只放入必需的物品。

6.2表面消毒：所有放入物品的外表面需用消毒剂擦拭。

6.3合理分区：将物品按“清洁区”（工作区后部）、“工作区”（中部）、“污染区/废弃物区”（工作区前部，靠近前格栅）有序放置。避免物品堆叠。

6.4避免堵塞：物品严禁覆盖前格栅和后格栅！确保格栅畅通。

6.5大件物品：大件物品（如离心机、振荡器）会严重干扰气流，应尽量避免放入。如需放入，应尽量靠后放置，并确保不影响气流。

5.2操作中

1.人员位置：坐姿或站姿舒适，正对BSC中央。手臂缓慢、平稳地垂直伸入工作区，避免在前窗开口处水平或快速晃动。操作时尽量将手臂放在工作区内。尽量减少手臂进出工作区的次数。避免将头伸入工作区或在前窗开口处交谈。

2.物品操作：所有操作应在工作台面中央靠后区域进行（距前格栅至少10-15cm）。避免将污染性材料（如敞开的培养皿、菌液）放置在靠近前格栅的位置。废弃物（吸头、手套、污染纱布等）应立即放入工作区内的专用防刺破生物危害废物容器中，容器应靠近前格栅（污染区），但不得堵塞格栅。

3.移液操作：必须使用机械移液装置！严禁口吸。吸头/吸管尖避免触碰容器壁或液体表面以外的地方。吸液或排液时动作要轻缓，避免产生气泡和气溶胶。废弃吸头应直接弃入含消毒液的锐器盒或生物危害废物袋（容器）