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来源于人或动物细胞系生物技术产品的病毒安全性评价

I．前言

本文件旨在为从人或动物(即哺乳动物、鸟类、昆虫等)的特定细胞系制备的生物技术产品提供病毒安全性的测试和评价方法，并提出了上市注册包装时应提交的一套资料。本文件所述病毒不包括非常规性传播因子，如与疯牛病(BSE)和瘙痒病(scrapie)有关的传播因子。有关疯牛病的问题，申请人：应与管理部门进行讨论。

本文件的范围涉及从特定细胞库引入的细胞培养物中所提取的产品，既包括从体外细胞培养物所提取的产品，如干扰素、单克隆抗体和重组DNA产品(包括重组亚单位疫苗)，也包括从体内如腹水内培养的杂交瘤(hybrid。ma)细胞中提取的产品。对于后者，有关其体内所繁衍细胞测试的特别注意点和附加资料，见附录1。灭活疫苗，含有自我复制因子的所有活疫苗以及用基因工程方法生产的活性载体都不属于本文件范围。

来源于细胞系的生物技术产品的一个共同特点是存在病毒污染的危险性，这种污染在临床上可产生严重的后果。污染可来自原细胞系(细胞基质)本身，也可来自生产过程中偶然带人的外源病毒。然而，到目前为止从细胞系提取的生物技术产品还没有发生传播病毒的问题。尽管如此，有关这些产品病毒污染的安全性，只有通过实行如下的病毒测试计划并在生产过程中对病毒的清除或灭活作用进行评估，才可能得到确实的保证。

控制生物技术产品的潜在病毒污染，可归纳以下相互联系的三条原则：

a)．对细胞系和其他原料，包括各种培养基，进行选择和测试，确保其不含可能对人有感染和/或致病作用的病毒。

b)对生产工艺中清除感染性病毒的能力进行评估。

c)在生产的适当步骤对产品进行测试，确保产品没有受感染性病毒的污染。

所有测试都不可避免地受到病毒定量分析本身的限制，即根据统计原则，能否测到低浓度病毒取决于样本大小。因此，单靠一种方法并不一定能够确定一个产品的安全性。在许多情况下，要确定最终产品没有感染病毒，不能单凭是否直接测到病毒而定，还需证明该纯化方法是否能将这些病毒消除或灭活。

在不同生产步骤中应采取的病毒测试方法和病毒清除研究，其类型和程度取决于多种因素，应逐一地进行分析；应考虑的因素包括：细胞库管理水平、所测定病毒的性质、培养基组成、培养方法、仪器设备的型号、细胞培养的病毒测试结果、生产工艺清除病毒的能力及产品类型和临床用途。

本文件的目的是为病毒测试1病毒清除试验的评估；设计病毒实验和病毒清除研究的方法提供一个总的框架。有关资料在各附录中加以说盼；所用定义参见所附专用词汇表。

制造商应根据其特定产品和生产工艺对本文件所提出的各项建议进行调整。生产商应对其确保病毒安全的总体方针作出解释并说明其依据。除了提供详细资料外，还应提供一份病毒安全性评估的总结，以帮助和利于管理部门审查。该总结应对病毒安全性研究的各个方面，以及与本文件有关的用于避免病毒污染的方针作一简单陈述。

Ⅱ．潜在的病毒污染源

生物技术产品的病毒污染可来自原始细胞系或来自生产过程中偶然带人的外源病毒。

A主细胞库(MCB)可能存在的病毒

细胞的病毒感染可以是隐性的或持久的(如疤疹病毒)，或内源性逆转录病毒。内源性逆转录病毒基因组一直存在于细胞内，可从一代细胞直接传给下一代细胞。这些病毒可以整体表达，或偶然表达成一种感染性病毒。

病毒可通过多种途径进入MCB，例如；

1)从受感染动物提取的细胞系；

2)使用病毒建立细胞系；

3)使用受污染的生物试剂如动物血清组分；

4)细胞操作过程中受到的污染。

B生产过程中可能带人的外源病毒

外源病毒可通过多种途径带入最终产品，其中至少包括以下几点：

1)使用受污染的生物试剂如动物血清组分；

2)用病毒作为载体表达某一编码蛋白的特异基因；

3)使用受污染的试剂，如单克隆抗体亲和柱(affinityc。lumn)；

4)组方中使用了受污染的赋形剂；

5)细胞和培养基操作过程中的污染。

对细胞培养的参数进行监控有助于早期测出可能污染的外源病毒

III．细胞系界定：病毒测试

合适的病毒测试方法是确定细胞系是否适用于生物技术产品生产的重要部分。

A对主细胞库(MCB)，工作细胞库(WCB)及体外细胞代次在生产限度之内的细胞进行病毒检测

不同级别细胞(包括MCB、WCB和体外细胞代次在生产限度之内的细胞)的病毒测试方法举例(见表1)。

1．主细胞库

应对MCB进行内源性和非内源性病毒污染的全面筛查。对于含一种或—J种以上人或非人灵长